GuruHealthInfo.com

Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.



законот за здравство


UtverzhdenyGlavnym gosudarstvennymsanitarnym vrachomRossiyskoy Федерација -Прво zamestitelemMinistra zdravoohraneniyaRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO9-ви јануари 1998 година godaData вовед - 8. Јуни 1998 година goda4.2. МЕТОДИ НА КОНТРОЛА. Биолошки микробиолошка дијагноза на дифтерија FAKTORYLABORATORNAYA INFEKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMU 4.2.698-981. Федералните службеници со цел референца - laboratoriidiagnostiki дифтерија infektsiiMoskovskogonauchno Институт за истражување за епидемиологија и микробиологија im.G.N. Gabrichevskogo (р Mazurova ИК, Д-р Мелников k.b.n. Kombarova С, О Борисова) и DepartamentomGossanepidnadzora руското Министерство за здравство (Žilina NY .2). Одобрени и го стави во сила голема gosudarstvennymsanitarnym доктор на Руската Федерација, првиот zamestitelemMinistra здравство на Руската Федерација од 8 април 1998 година Г.3. VvedenyvzamenMetodicheskihukazaniy4.2.589-96"Лабораториска дијагноза на дифтерија инфекција".1. насоки област primeneniyaMetodicheskie подготвени да им помогне на spetsialistambakteriologicheskih санитарни лаборатории - epidemiologichoskoysluzhby, здравје - установи и научни истражувачки институт за да се подобри laboratornoydiagnostiki дифтерија infektsii.2. Карактеристики на предизвикувачкиот агенс на дифтерија infektsiiVozbuditelem difteriynoyinfektsiiyavlyayutsya toksigennyeCorynebacterium diphtheriae. Nontoxigenic Corynebacterium дифтерија difteriine предизвика инфекција. "етиолошки" etihmikroorganizmov значење кога заразни болести (фарингитис, артритис, ендокардитис, итн) се потребни посебни доказ. Кога vydeleniinetoksigennyh соеви на C. diphtheriae од пациенти со суспектна nadifteriynuyu инфекција треба да се обрне внимание на pravilnostprovedeniya бактериолошко испитување и оценување врз основа на способноста toksigennyhsvoystv.V C. diphtheriae производи ekzotoksinlezhit феномен фаг (или lysogenic) пренамена. Konversiyanetoksigennyh видови на C. diphtheriae во naoborotvosproizvoditsya toxigenic и само во посебни, експериментални услови. Во tehsluchayah кога за време на почетните сеење на материјалот изолиран toxigenic otbolnyh дифтерија, а во povtornyhobsledovaniyah по антибиотска терапија - netoksigennyekorinebakterii дифтерија, може да се претпостави дека кога ispolzovaniiantibiotikov пред да исчезне toxigenic видови kakbolee чувствителни на својата акција, и nontoxigenic shtammyprodolzhayut распределени. Истата ситуација може да се создаде и prisanatsii антибиотици бактерии превозници, и во исто време vydelyayuschihtoksigennye nontoxigenic Corynebacterium дифтерија. Откривање Utaka медиумите во повтори анкети само netoksigennyhshtammov не може да се толкува како губење на способноста shtammovprodutsirovat ekzotoksin.Taksonomicheski близок поглед на C. diphtheriae се C.ulceransi C.pseudotuberculosis (C.ovis). Овие микроорганизми - prirodnyepatogeny говеда и ситен добиток, коњи. Otmechenasposobnost овие видови на бактерии произведуваат токсини podobnyydifteriynomu. Постојат, исто така, "nontoxigenic" видови. распределба Izvestnysluchai "toxigenic" C.ulcerans во клинички kartinezabolevaniya слични на difteriey.Na орофарингеална слузницата на носот и нормално chastovstrechaetsyalozhnodifteriynayapalochka Хофман (C.pseudodiphtheriticum). Способност да се изолира и identifitsirovatdannye бактерии служи како критериум за оценување на квалитетот на rabotybakteriologov interepidemic period.Vse микроорганизми од родот Corynebacterium yavlyayutsyagrampolozhitelnymi стапчиња, а не формирање на спори obladayuschimirazlichnoy степен на полиморфизам. Повеќето видови расте подобро vaerobnyh usloviyah.Obychno колонии микроорганизми од родот Corynebacterium naplotnyh хранливи медиуми (на пример, на крвен агар) imeyutserovato - бела или жолтеникаво, нетранспарентно ilipoluprozrachnye, тркалезна форма, со дијаметар од 1 - 3 мм. Најчесто onibyvayut мека, маслен конзистентност, иако некои видови rodakorinebakteriimogutobrazovyvat груба R-kolonii.Predstaviteli од овој вид не имаат висок fermentativnoyaktivnostyu. C.diphtheriae расте 37sh C, отпорни на nizkoytemperature чувствителни на високи. Сите дезинфекција veschestvav конвенционалните концентрации (3 - 5%) korinebakteriidifterii уништени во рок од 20 - 30 минути. Toxigenic C.diphtheriae boleechuvstvitelny на антибиотици од nontoxigenic. Vozmozhnopoyavlenie антибиотик-отпорни видови. Широко opredelyatchuvstvitelnostkantibiotikam изолира otbakterionositeley не треба да се должи на Несогласување rezultatovlaboratornoy примерок на дејството на антибиотици врз телото на vozbuditelyadifterii cheloveka.Dlya C.diphtheriae назначен значајни полиморфизам -raznoobrazie големина и форма на клетка. Клетките имаат форма на клубови, тенис, итн парење мобилен интерпозиција потсетува rimskietsifry X, V. Кога боја често се наоѓа vyrazhennayavnutrikletochnaya striation, поради zerenvolyutina присуство. Опишан афинитет volutin на метиленско сино и оние priobrabotke боја гранули или ленти (кластери на гранули) дамка сина боја, а во некои протоплазма sluchayahmozhet здобијат rozovyyottenok.Ispolzovanievbakteriologicheskoy пракса okraskipoGramuyavlyaetsyanetselesoobraznym, или дури и poskolkukletkiC.diphtheriaelegkoobestsvechivayutsya spirtomimogutvyglyadetvmazkegramvariabelnymi gramotritsatelnymi.Dlya C.ulcerans и C .pseudodiphtheriticum sklonnostk карактеризира со паралелни аранжман на клетките. 24 - 48 h на културата etihvidov често се јајчест облик kletok.Po форма колонии и некои биохемиски svoystvamC.diphtheriae поделени во културно - biohimicheskievarianty - гравис, mitis, intermedius.Cherez 48 - 72 часа на варијанта раст mitis формира видот koloniiS - мазни, дијаметар од 1 - 2 mm-варијанта SR-gravisobychno конвексен колонии со подигнати центар со дијаметар од 2 - 3 mm колонии олицетворение intermedius - S-тип, мали, рамни, мазни, срамнети со дијаметар од работ 0.5 - 1 mm. Следниве опишува само dvakulturalno - биохемиски олицетворение - гравис и mitis, па kakbiovar intermedius ретки и биохемиски svoystvamne разликува од biovar mitis.Na крв telluritovyh медиумите по 48 часа на раст koloniiC.diphtheriae олицетворение гравис, како и колонија C.ulcerans, црна мат имаат радијални striations. KoloniiC.pseudodiphtheriticum имаат карактеристичен светло obodok.V bakteriologicheskoypraktikeopiratsyatolko namorfologicheskie својства колонии или микробиолошки клетки priidentifikatsii C.diphtheriae, не е можно. Opisanysluchai бактериолошки хипо- и hyperdiagnostics (55% и 14,5%, соодветно), кога се користи uchettolkomorfologicheskih знаци. Кога идентификување C.diphtheriaeneobhodimo употреба тест комплекс првенствено патогеност (toxigenicity) Главниот priznakavozbuditelya difterii.Opredelenie toxigenic својства врши bacteriologists првиот ден на раст сомнителни колонии на плочи pervichnogoposeva материјал. За да се избегнат грешки во коринеформни бактерии определување toksigennyhsvoystv, потребно е да се учат на овој показател umaksimalnogo број на колонии од плочите на основните техники на усогласеноста poseva.Pri опишани подолу може да се изучува toksigennostbolee од 20 сомнителни колонии од една анализа. Nelzyaizuchat материјал во множина раст сомнителни koloniytolko 1-2 blyashkah.Fermentativnaya активност на микроорганизми студирал putemopredeleniya tsistinazy ензим, уреаза, способност да се прилепи dokisloty гликоза, сахароза, скроб. Во ретки случаи, kogdaneobhodimo идентификуваат C.ulcerans, додаде navosstanovlenie нитрат тест nitrity.Uchityvaya дека кога difteriynoyinfektsii идентификација патоген водечки елемент е утврдување на присуство на токсини otsenkidrugihsvoystvimeet помошни znachenie.Ispolzovanie "долг" јаглени хидрати е бројот на вишок priidentifikatsiya C.diphtheriae.Prakticheskimbakteriologam ангажирани во лабораториска дијагноза на дифтерија, не trebuetsyaprovodit идентификација на видовите други микроорганизми rodaCorynebacterium. Во исто време, во лабораторија, каде предизвикани provoditsyadiagnostika болести "nedifteriynymi"Corynebacterium, недоволна употреба дури и "долг"јаглени хидрати ред. За точна податоци за идентификација mikroorganizmovneobhodimo користат chemotaxonomic истражувачки методи, како што се откривање на присуство на mycolic киселини, клеточен ѕид на бактерии и некои vsostave drugie.Takim начин микроорганизмот е селектиран vozbuditelemdifterii, ако има toxigenic својства opredelennymspektrom ензимска активност (расцепување на глукоза, скроб, отсуство на сахароза распаѓање ензим tsistinazy присуство, отсуство fermentaureazy) и карактеристични морфолошки -kult uralnymi знаци (формирање на колонија на црна или serogotsveta krovyano - telluritovyh средини прилагодени, prineobhodimosti, мобилен морфологија - полиморфна не формирање sporpalochki) .3. IssledovanieBakteriologicheskoe бактериолошки студии беа спроведени за да laboratornoydiagnostiki дифтерија инфекција, да се идентификува извори на инфекција за распространетоста на toxigenic inablyudeniya korinebakteriidifterii.VZYaTIE И ИСПОРАКА MATERIALA1. Успехот на бактериолошко испитување во znachitelnoystepeni зависи од навремено и точно фаќање на materiala.2. Земајќи материјал се специјално obuchennyemeditsinskie здравствените работници - грижа uchrezhdeniy.3. Во студија за да се испита орофаринксот и дифтерија nos.Pri дифтерија ретки локализации (око, уво, раната, кожата, вагината) освен лезии треба да се земе материјал од smindalin nosa.4. Земањето на материјалот се врши со користење на стерилни брисеви vatnyhsuhih. За нивно подготвување со помош на дрвена ilimetallicheskie (од нерѓосувачки челик) прачки, еден од kontsovkotoryh цврсто рана слој на абсорбента памук (primerno120 mg памук). Тампоните треба да биде во форма "капки"и не"вретено". Тампоните се монтирани во епрувета со плута или vatnymiprobkami, така што на крајот на тампонот не допира дното и stenokprobirki. Стерилизира тампони во воздух печка топло во temperature140sh C за еден час или со автоклавирање на 0,5 банкомат. 30 min.5. Материјал од орофаринксот и назален брисеви земање поединечни празен стомак или не порано од два часа по оброкот, кога horoshemosveschenii, со користење на шпатула, без да се допира на стапче јазик ivnutrennih површини на образите и забите. Еден брис sobirayutmaterial со лезии на орофаринксот - крајниците и prineobhodimosti - со арки на мекото непце, исушена или фаринксот zadneystenki. Во присуство на плоча, материјалот треба да се преземат sgranitsy болни и здрави ткива, лесно притискање на nihtamponom. За преземање на материјал од носот со користење на друга стапче што е прв пат е воведен во една, а потоа и во другите ноздра, nekasayas snaruzhi.6 ноздрите. Кога ларингоскопија материјал (лигите филм) sobirayutneposredstvenno на гркланот. Материјал со лезии kozhisleduet соберат сува памучна по отстранувањето на корка или strupa.7. Тампоните имаат bytdostavleny во laboratoriyunepozdnee 3 часа по земањето на материјалот. Кога provedeniiobsledovaniya контингенти во оддалечените области bakteriologicheskihlaboratory, се препорачува да се засади материјал на чаша spitatelnoy на животната средина или употреба на транспортни sredu.8. Во случај на транспорт медиум материјал sobirayutsuhim натопени во цевка тест со животната средина и да се обезбеди дека приклучокот не е влажно стапче. Имајте на ум дека primenenietransportnoy животната средина се протега издавање конечна otvetana еден sutki.9. Куп (или епрувета со транспорт медиум) со posevomissleduemogo материјал може да биде поставен за одгледување vtermostat на 37sh C за 15 - 18 часа, по што дава vlaboratoriyu.10. За време на транспортот на долги растојанија како тампони mozhnoispolzovat presoaked rastvoromglitserina. Тампонот импрегнирани со 5 проценти раствор на глицерин vdistillirovannoy водата истекувала на ѕидот на крвниот сад со растворот, подобрување на ин витро, како и сува попивам вода и автоклавен pri0,5 банкомат. 30 Min.11. Студената сезона тест материјал е донесено во вреќи vbaklaboratoriyu - термоси, за да се спречи тоа од zamerzaniya.12. Vsluchaeneobhodimosti на Corynebacterium дифтерија во postmortalnyhissledovany материјал tselesoobraznobrat со крајниците, ларинксот, и носната шуплина како во vnutrennihorganah redko.13 патоген откриен. Секоја цевка со материјалот за испитување (грлото, носот ilidrugaya локализација) е во прилог на број. број прикачен цевка spiskeukazyvaetsya, презиме, име (или иницијали), возраст, името на институцијата, водич материјал или дома adresobsleduemogo, целта на истражувањето (со дијагностички ukazaniemdiagnoza, по епидемиолошки индикации, превентивна заштита), датумот на преземање materiala.HOD истражување. ПРВА DENPosev materiala.Material за испитување на орофаринксот, назална или drugihporazhennyh седишта одделно носителка на површината на густа хранливи медиуми izrekomenduemyh, влегоа во чаши Petri.Posev од едно лице за да се произведе една чаша користење prietom половина од површината на семе средни izrotoglotki материјал, а вториот - за култура материјал од носот. Кога posevemateriala од кожата или на други места да додадете уште една чаша. Не е дозволена материјална култура од неколку лица на chashku.Pri семенски материјал се нанесуваат во медиум од сите страни тампон nauchastke површина од 2 x 1 квадратни. см - формирање на такви "игралиште"Тоа е мора. Потоа, истиот брис накалемени ostavshuyusyapoverhnost 1/2 чаша. Сеење произведе чести neperekryvayuschimisyashtrihami без отстранување на тампон од површината на медиумот за хранливи материи и непроменлива позиција на тампон. Овој метод овозможува zaseyatves саден материјал со тампон за да се добие изолирани колонии (chistuyukulturu) за понатамошна идентификација на сеење директно на chashkepervichnogo дека го скратува анализа odnisutki. На инокулираните плочи или цевки кои содржат транспортен медиум pomeschayutv термостат во 37sh C. Сеење на транспорт медиум за да се произведе наследување ден густа медиум стапче ostenki притисне цевки или петелки, земањето на материјалот од osadka.Posev треба да се изврши на плочи со медиумот, температура или загреани prikomnatnoy во инкубатор (15 - 20 минути) .VTOROY day1. Колонии расте на плочи 24 преку прелистување chasaposle саден материјал (ако материјалот е обложен во вториот polovinednya, на гледање е направено во точно 24 часа, на пример, исто така, втората половина на ден) или визуелно или со користење на стереоскопски mikroskopabinokulyarnogo (МБС) .2. Чаши со колониите, како дифтерија, земени dlyadalneyshey идентификуваат култура во сите тестови. Mikroskopiipreparatov - брисеви "сомнителни" Колонии може да биде nonconductive. "сомнителни" колонија krovyano - telluritovyhsredah по 24 часа на светлината раст - сива, конвексен, срамнети рабови, во текот на 48 часа - сивата со метален боја, srovnymiili малку назабени рабови, се распаѓа priprikosnovenii јамка или мека конзистентност. од "сомнителни"колонии е подготвена препарати - mazki.Kletki Corynebacterium дифтерија од културата одгледуваат на sredahs инхибитори на раст (калиум tellurite, hinozol) може да bytukorocheny, задебелена, но својствени нивната локација и polimorfizmsohranyayutsya. Евалуација на морфолошките особини не pozvolyaetustanovit видови на микроорганизми, но daetvozmozhnost би требало да го однесе на родот korinebakteriy.Esli микроскопија покажуваат coli карактеристика rodakorinebaktery, овие колонии се избрани за dalneysheyidentifikatsii во сите тестови. Во случај на други formmikroorganizmov (коки, квасец, спори прачки), овие колонии dalneysheeizuchenie prekraschaetsya.3. Во случај на раст "сомнителни" слични колонии треба веднаш да се продолжи со истражување на нивните својства toxigenic студија svoystv.Toksigennye не помалку од 2 izolirovannyhkolony со засадување на една половина од секоја од колонии на медиумот dlyaopredeleniya toxigenicity и незапалливи јамка, - во Пиза медиум, а другата половина од колониите - во цевка со beveled syvorotochnymagarom за зачувување и акумулација на културата. Кога nevozmozhnostisnyat 1/2 колонии за сеење на toxigenicity и на среден Pizuispolzuetsya материјал kolonii- целата култура на agarisklyuchaetsya закосена и, уште повеќе, од цевки културата користи sproboy Пиза. Имајќи предвид дека по 24 часа на раст на големини колонија и материјал imeyutnebolshie на 1/2 или 1 колонии може bytnedostatochno за акумулација на дифтерија токсин во natoksigennost примерок, и дека во материјалот mogutnahoditsya истовремено toxigenic и nontoxigenic raznovidnostikorinebaktery дифтерија, тоа е од суштинско значење за да се испита toksigennyesvoystva од можно, на максималниот број на колонии (повеќе од 20), мешање за 5 - 7, слични на еден blyashku.4 колонии. Ако не е возможно да се одредат поставување toksigennostklassicheskim метод (види. П. 3) поради недоволна velichinykolony, нивната студија, мешање од ист тип колонии neskolkihblyashkah. Не гори преку телефонска линија, накалемени во средата Пиза. Чаши spervichnym сеење на материјалот за испитување беше ставен повторно vtermostat за 24 часа и ги разгледуваат повторно (по tretisutki) .5. Ако само една колонија расте, тоа може да се сее nasredu за утврдување toxigenicity и без горење циклус на stolbiksredy Пиза да се утврди tsistinazy. Identifikatsiimozhno за понатамошна употреба на цевката за култура со примерок или со Пиза blyashkicherez 48 часа на раст, или 24 часа на раст на vyyavlennyhtoksigennyh kultury.6 својства. Со цел да се издаде прелиминарен одговор на сомнителни колонии раст sluchaemnozhestvennogo може proizvestiposev неколку колонии во течен медиум dlyapostanovki Phragmites, Sachse надополнува дополнителен примерок (3 -5 слични колонии чување по 30 мин на инкубација.) И Пиза примерок (5 - 6 слични колонии , сметководство преку 3 часа на инкубација). Priharakternoy за Corynebacterium дифтерија во МБС колонија морфологија, мобилен морфологија од микроскопија, Sachse негативен примерок, на примерок позитивни резултати Пиза, Phragmites може vydatpredvaritelny одговор на откривање на културата сомнителни nakorinebakterii дифтерија по 48 часа (на третиот ден) со сеење momentapervichnogo истрага materiala.TRETY day1. По 24 часа, кога одредена liniypretsipitatsii на медиум за утврдување toxigenicity, polozhitelnoyprobe на tsistinazu, а студирал на културата идентификувани kakkorinebaktery toxigenic дифтерија и Ставање dokumentirovannyyotvet.Pri отсуство на конкретни precipitin линии на среден dlyaopredeleniya toxigenicity, чинии се инкубираат за уште 24 chasa.2. Култура и одгледуваат на агар аранжман или серум sproby Pisa (по извршената евалуација на нејзината чистота) се носител во медиум dlyaopredeleniya биохемиски олицетворение (сахароза, гликоза, скроб) ifermenta уреаза (уреа хидролиза) .3. На плочи со примарен инокулација issleduemogomaterialaprosmatrivayut визуелно или со ре-МБС 36 -48 часа на инкубација во инкубатор. Во присуство на "сомнителни"Колонии учат нивните toxigenic својства tsistinaznuyu активност ivydelyayut чиста култура на агар skoshennyysyvorotochny (см. Втората студија ден, стр. 3) .Ако не колонии осомничени korinebakteriidifterii, даде конечниот одговор дека Corynebacterium difteriine vyyavleny.Pri нема раст на агар почетна сеење cherez48 часа на инкубација, во некои случаи бара повтори преземање iissledovanie материјал. Целосно отсуство на раст често vsegosvidetelstvuetonarusheniipravilbakteriologicheskogoobsledovaniya (изведува испорака, засадување на материјал и kultivirovaniyaissleduemogo) .CHETVERTY ден (или петти) 1. Кога специфична precipitin линии dlyaopredeleniya toxigenicity средина (24 часа на инкубација, мостри natoksigennost 48 часа раст на примарните сеење) polozhitelnoyprobe да им даде tsistinazu документирани одговор vydeleniitoksigennyh difterii.2 corynebacteria. Култура и одгледуваат на агар аранжман или серум sproby Пиза, по утврдување на нејзината чистота, се накалемени на среден dlyaizucheniya биохемиски својства (Подсвиркват медиум со сахароза, гликоза, скроб, Sachse примерок со уреа или супа) .3. Повторно (по 48 часа) да ги земе предвид резултатите од natoksigennost примерокот поставени во текот на денот 2 на студијата. Odnovremennoproizvodyat saccharolytic чување својства и уреаза активност vprobah поставена на 3 ден issledovaniya.Pri отсуство на специфични precipitin линии 48 примероци chasovposle стоп да toxigenicity но polozhitelnyhrezultatah примероци за tsistinazu, гликоза, уреаза негативни rezultatahprob и сахароза, култура идентификувани kakkorinebakterii дифтерија nontoxigenic, укажува biohimicheskogovarianta.Pri изолација на toxigenic Corynebacterium difteriidopolnitelno даде одговор за биохемиски Propert tvah (ili96 72 часа после почетна сеење на материјалот) .BAKTERIOLOGICHESKOE ZAKLYUCHENIE1. Во присуство на специфични precipitin линии со opredeleniitoksigennyhsvoystv, позитивен тест за tsistinazu, негативен тест за уреаза, култура ibiohimicheskie карактеристични својства (сахароза, гликоза, скроб) pozvolyayutzaklyuchit кој се однесува на изолирани култури korinebakteriydifterii ум toxigenic, биохемиски или mitis.2 олицетворение гравис. Отсуство на посебни линии со precipitin opredeleniitoksigennyhsvoystv, позитивен тест за tsistinazu, негативен тест за уреаза, култура ibiohimichekie карактеристични својства ни овозможуваат да се заклучи дека изолиран kulturaotnositsya на видовите Corynebacterium дифтерија, nontoxigenic, биохемиски или mitis.3 олицетворение гравис. Во присуство на precipitin линии идентични контрола spetsificheskimliniyam вирус Corynebacterium дифтерија, polozhitelnyhprob уреаза, tsistinazu, гликоза и скроб ферментација, отсуство на сахароза ферментација vnitrity нема намалување на нитрати, културата припаѓа на ultserans на коринеформни ум toxigenic variant.Pri не precipitin линии при утврдување toksigennyhsvoystv и имате сите други карактеристики карактеристика на dlyakorinebaktery ultserans, nontoxigenic опција ibakteriologichesky одговор се смета за негативен ym.4. Кога ќе изберете Corynebacterium Gofmanailidrugihdifteroidov, бактериолошки одговор otritsatelnym.5 веруваат. Во некои случаи, кога дијагностички преглед и poepidpokazaniyam, може да се даде прелиминарно одговор. Etotrebuet поставување на дополнителни примероци, присуството на kachestvennyhpitatelnyh средини, тестирање - системи за производство и Phragmites spetsialnoobuchennogo персонал. Привремената одговор може да се издаде повеќе раст слични prinalichii "сомнителни" koloniyna почетна сеење јадења по 24 часа на инкубација (види. vtoroyden студии, бр. 6) .Predvaritelny одговор може да се смени по okonchaniyabakteriologicheskogo issledovaniya.6. На видови на Corynebacterium дифтерија atipichnymimorfologicheskimi, биохемиски својства toxigenic Corynebacterium ishtammy ultserans треба да се однесува federalnuyureferens - лабораторија за дијагноза на дифтерија инфекција priMoskovskom Институт за истражување за епидемиологија и микробиологија im.G.N. Gabrichevskogo за понатамошни студии (125.212 Ул Адмирал Макаров, 10.) Систем за БАКТЕРИОЛОШКИ studies1 denPosev issleduemogomateriala на selektivnuyudifferentsialno - дијагностички или, доколку е потребно, vtransportnuyu медиум. Инкубација во инкубатор во 37sh C.2 ден (24 часа) 1. колонии на студијата, ако е можно - на postanovkaproby toxigenicity, tsistinazu и сеење култура skoshennyysyvorotochny agar.2. При користење на транспорт медиум мора да се proizvestiperesev на селективни диференцијални - дијагностички sredu.3. Кога повеќе раст, доколку е потребно, mozhnoprovesti студии за издавање на претходна одговор -additional примерок Пиза, Sachse и култура "сомнителни" koloniyv течен медиум за откривање на дифтерија токсин vRNGA.3 ден (48 часа) 1. Профитабилноста анализа на примероци за toxigenicity и tsistinazu поставен на вториот ден од студијата. Ако nalichiyaspetsificheskih врнежи линии и позитивен примерок Pizuvydayutdokumentirovannyyotvet распределба toksigennyhkorinebaktery difterii.2. Сеење чиста култура избрани вториот denissledovaniya, Подсвиркват во медиум за да се учат на биохемиски својства (сахароза, гликоза, скроб, уреа) .3. Посетување (48 часа) примарен posevavizualno чаши или со користење на МБС. тестови стоп за toxigenicity, tsistinazu и скрининг на колониите на Серум agar.4 beveled. Во случај на транспорт, животна средина, се разбира issledovaniyasm на. почнувајќи со n. 1 на вториот ден, а потоа во skheme.5. Vydachabakteriologicheskogootvetaobotsutstviikorinebaktery difterii.6. Кога поставување RNGA за откривање на дифтерија токсин prinalichii позитивен резултат во оваа реакција и откривање uissleduemoy култура tsistinazy ензим отсуство fermentaureazy може да даде прелиминарна одговор за да се распредели vozbuditelyadifterii.4 ден (72 часа) 1. Сметководство за култура на toxigenic особености избрани во denissledovaniya 3 (по 48 часа на раст на примарен сеење), и одговор на распределба vydachadokumentirovannogo toxigenic korinebakteriydifterii. Закажувам култури избрани за утврдување biohimicheskihsvoystv (сахароза, гликоза, скроб, уреа) .2. Сметководство култура биохемиски својства (toxigenic ilinetoksigennoy) распределени во вториот ден на студијата (cherez24 час инкубација почетна сеење) .Vydacha бактериолошки одговор netoksigennyhkorinebaktery распределба дифтерија укажува idopolnitelnogo олицетворение биохемиски одговор на биохемиските својства на дифтерија toksigennyhkorinebaktery доделени ranee.5 ден (96 часа) издавање на распределба бактериолошки одговор (48 chasovinkubatsii почетна сеење) или toxigenic netoksigennyhkorinebaktery дифтерија y Azan биохемиски varianta.4. Методи за идентификација на патогенот difteriynoyinfektsiiOPREDELENIE toxigenic KORINEBAKTERIYDIFTERII својства на реакција со користење на врнежите во метод на гел-врз основа за утврдување на toxigenicity korinebakteriydifterii (Елек тест) лежи процесот immunodiffuziitoksina контра и antitoxic антитела во густата хранлива средина. Наместо оптимална квантитативна корелација помеѓу токсинот произведен од Corynebacterium и антитоксин nafiltrovalnuyu обложена хартија е нивната интеракција со obrazovaniempretsipitata како бела линија или "мустаќи".Toksigennost Corynebacterium дифтерија утврдени, обично во чиста култура (или културата на поединечни колонии со skoshennogoagara, или примерок Пиза). колонии на смесата или култури zagryaznennyepostoronneymikrofloroy исто така може да бидат тестирани natoksigennost. Во отсуство, во овој случај, гел забрзува vagarovom искуство треба да се повтори со посветен chistymikulturami.Dlya продукции примероци за toxigenicity мора да имаат: стерилни Петри сад со рамно дно, хранлив медиум - agarMartena или сува средни трговски хранливи материи normalnuyusyvorotku говеда крв, стерилни izfiltrovalnoy хартија ленти за мерење на 1,5 cm x 8 см, ochischennyyfermentolizom специфични сорпција и дифтерија антитоксин (vdalneyshem од антитоксин) protivodifteriynuyuantitoksichesk та коњски серум, терапевтски (во dalneyshemimenuetsya antitoxic серум), или завршени хартија diskis антитоксин применуваат на нив, и - kontrolnyytoksigenny Corynebacterium дифтерија вирус 24 - 48 часа rosta.Prigotovlenie чаши за поставување probyna toksigennostPitatelny агар за да се утврди toxigenicity tselesoobraznorazlivat цевки 10 ml (износот потребен dlyaprigotovleniya една чаша). Кога голема количина на работа pitatelnyyagar издаваат во ампули во 70 - 80 ml (7 - 8 примерокот чаши natoksigennost). Хранлив агар треба rasplavlivat tolko1 повеќе различни топење нарушува својства на медиумот. Pitatelnyyagar rasplavlivayut во водена бања на 90sh C, веднаш izbani отстранети, ладење на 50sh C и додадете 20% говеда серум krupnogorogatogo. Така, до 10 ml на хранлив агар е додаден 2 mlsyvorotki добиток, предизвика и истури асептично во стерилен петриеви сад, на дното raspredelyayutsosedu внимателни chashki.V ротација во центарот на Купот на површината на obozhzhennympintsetom на зацврстувањето на агар поставени лента на филтер-хартија propitannuyuantitoksinom ( или antitoxic серум) .Chashku сушење во печка на 37sh C во период од 15 -20 мин., не превртувајте надолу. Кога се користи bumazhnyhindikatornyh вози хранлив агар плоча исушен donaneseniya sredy.Chashki дискови на површината на медиумот за да се утврди toxigenicity продавница nerekomenduetsya.Prigotovlenie хартија polosokPoloski филтер хартија сече со големина од 1,5 см х 8 см, обвиткани со 2 - 4 парчиња во торба и стерилизирани во avtoklavepri 0.5 банкомат за 30 минути. Торби со хартија poloskamihranyat во стерилна петриеви сад до 3 nedel.Pered стоп примероци се на содржината toxigenicity santitoksinom на ампулата се растворени во 1 ml стерилен fiziologicheskogorastvora, префрлен во стерилни цевка и покажуваат neydannye етикети (растворен антитоксин temperature4 се чуваат на - 6sh C не надминува 10 дена) . Филтер-хартија obozhzhennympintsetom става во стерилен петриеви сад. На секое poloskunanosyat антитоксин 0,25 ml содржи 500 МЕ во 1 ml. Dlyaudaleniya вишокот на серумски навлажнета лента применуваат ksterilnoy чаша капак Petri.Pri користење на antitoxic серумот (vmestoantitoksina) се бара за разредување нејзините до 500 ME 1 ml.Razvedenie antitoxic syvorotkiSoblyudaya стерилен техника, antitoxic perenosyatiz серум ампули во стерилен цевка. На цевка укажуваат dannyeetiketki и рок на траење. Чување на серумот на 4 -6sh C.Syvorotka мора да се разреди со стерилен содржината fiziologicheskimrastvorom до 500 МЕ во 1 ml. Комерцијални подготовка mozhetimet друга дејност (5000 ME, 10000 ME, 20000 МЕ) и razlichnyyobem.Naprimer во ампула содржи 10000 МЕ (со волумен од 4,8 ml, kakukazano кутија етикета со ампули) antitoxic syvorotki.Dlya поедноставување на пресметките, вкупната количина на серум може да биде изведува za5 ml. Како резултат на тоа, во 1 ml од серум содржани 2000 МЕ (10000 МЕ: 5 = 2000 МЕ). За да се добие 500 МЕ во 1 ml sleduet1 ml разредена серумот на 4-пати, т.е. до 1 ml серум dobavit3 ml стерилен физиолошки раствор. Кога neobhodimostimozhno разредена серум во помали количини: 0.1 ml syvorotkidobavit до 0,3 ml од физиолошки раствор или 0,2 ml syvorotkidobavit 0,6 ml физиолошки раствор или 0,3 ml syvorotkidobavit 0,9 ml на солена вода и t. d.Razvedenie серумот може да се направи на друг начин. Ако, на пример, содржани во ампула 5000 МЕ серум во волумен од 2,5 ml, МЕ 500 е содржан во 0,25 мл серум. За оваа година dobavlyayut0,75 ml стерилен физиолошки раствор и серум poluchayutrazvedenie 500 МЕ 1 ml.Razvedennuyu серумот може да се чуваат во период од 7 дена на temperature4 - 6sh C.POSTANOVKA PROBYKulturu носителка во "плакети" со дијаметар од 0,6-0,7 cm narasstoyanii 0,7-0,8 см, освен и 0,5 см од хартија работ poloskifiltrovalnoy. Една чаша треба да бидат засадени повеќе од 10 "плакети". Од нив, 6 "плакети" тест култура 4 -kontrolnogo вирус. Кога еден мал износ на накалемени ispytuemogomateriala 6 контрола "плакети" и 4 - на предмети (Слика 1. *>). Чаши со сеидба беше ставен во термостат на 37sh C .-------------------------------- *> Не privoditsya.Uchet rezultatovRezultat чита во 18 - 24 и 48 часа rosta.Sleduet да се сфати chtopreparatantitoksicheskoyprotivodifteriynoy серум, во прилог на difteriynomuantitoksinu антитела содржи антитела на антигени во формулирањето на микробиолошки примерок kletki.Poetomu да toxigenicity ispolzovaniemdannogo со дрога преципитати може да се формира не само vrezultate поврзување на токсин со антитоксин (spetsificheskiepretsipitaty), но, исто така, во интеракција на антибактериски антитела skomponentami corynebacteria клетки d ifterii (nespetsificheskiepretsipitaty). На вториот може да се формираат како toxigenic, погрешно бројот и контрола на вирус, додека во netoksigennyhkorinebaktery дифтерија. Понекогаш има појава на mnozhestvennyhliny врнежи. Неспецифични преципитати обично е блага, имаат неопределен црти се појавуваат повеќето од 48 -72 часот, во ретки случаи може да се појави на прв sutki.Kriteriem процени специфичноста на фузија на талози е liniypretsipitatsii тест вирус со специфични liniyamikontrolnogo toxigenic вирус. Во случаи кога ukontrolnogo вирус формирани и неколку линии на врнежи, специфични треба да се смета повеќе точни и почетокот на poyavlyayuschiesyapretsipitaty. Затоа, гледање на примерок чаши на toksigennostosuschestvlyayut по 18 - 24 часа од моментот на своето производство. Ако vtechenie овој пат од вирус pretsipitatsiine линија контрола се откриени, тоа претставува кршење на usloviypostanovki reaktsii.Varianty оцени како одговор на резултатите: 1. тест култура Corynebacterium дифтерија yavlyayutsyatoksigennymi На доколку се врнежи линии се спојуваат iliimeyut тенденција да се логирате со релевантните контрола spetsificheskimiliniyami toxigenic shtamma.2. тест култура Corynebacterium дифтерија yavlyayutsyanetoksigennymi The ако: а) на линијата на врнежите формирана тест култура, во отсуство на присуство на специфични линии врнежи ukontrolnogo вирус б) линија на врнежи не може да се спојат со spetsificheskimiliniyami контрола на врнежи вирус и раце или imeyuttendentsiyu вкрстување со нив (nonidentical , nespetsificheskielinii) -C) линија precipitin тест култура snespetsificheskimi линии се спојуваат контрола вирус-г) врнежи тест линија култ Урс sospetsificheskimi линии се сечат и се спојуваат со неспецифични liniyamikontrolnogo shtamma.Ochischenny ензимска хидролиза и специфични сорпција антитоксин Не содржи антитела на компоненти на микробиолошки клетки. Кога ispolzovaniietogo подготовка неспецифични precipitin линии не obrazuyutsya.METODIKA toxigenic SVOYSTVKORINEBAKTERY ОПРЕДЕЛУВАЊЕ со дифтерија INDIKATORNYHBUMAZHNYH диск со ANTITOKSINOMNa петриеви сад површина со медиум за микробиолошки поставени opredeleniyatoksigennosti дифтерија индикатор тркала sdifteriynym антитоксин. Околу секој диск 5 antitoksinomformiruyut "плакети": две "плакети" - вирус контрола и три -ispytuemye (една анализа најмалку две сомнителни koloniyamiformiruyut "плакети" од изолирани колонии и -од мешавина од 3 - 6 koloniy- слични слики од истиот analizamozhno се одржи околу другите диск антитоксин). сите пет"плакети" се наредени симетрично околу дискот на растојание од 0,8 smot нејзиниот раб. На дијаметар на секоја "плакети" 0,8 см. На една чаша Petrimozhno се сместат до четири дискови антитоксин и соодветно 20 "плакети" култури. Чаши со posevamipomeschayut во термостат на 37sh C.Rezultat реакција прочитате на 18 - 24 часа, а 48 часа -through. Присуството на врнежи линии помеѓу santitoksinom дискот и тест култура покажува eetoksigennosti. Студијата се смета за токсичен култура, врнежите оваа култура esliliniya спои во еден агол со linieypretsipitatsii контрола вирус. Недостатокот на врнежи линии uispytuemyh култури по 48 часа, ако тие имаат kontrolnyhshtammov не упатува на toxigenicity имаат izuchaemyhkultur. precipitin линија во контрола видови dolzhnypoyavlyatsya после 18 - 24 часа. подоцнежната појава на liniypretsipitatsii бара верификација на хранливи материи за контрола на квалитетот средни ilizameny shtamma.Hranenie контрола на притисок во laboratoriiDlya контрола на складирање вирус во лабораторија mozhnoispolzovat полуцврсти агар серум подготвен nabulone Мартин или други хранливи материи супа (pH 7,6). Чувајте vholodilnike пресадување еднаш на секои 2 - 3 месеци. Semiliquid agarrazlivayut 8 ml цевки и 1 ml од говеда syvorotkikrupnogo skota.Kontrolny toksigennyyshtammkorinebaktery дифтерија олицетворение гравис добиени во Државниот Институт за истражување на стандардизација ikontrolya медицински и биолошки preparatovim.L.A. Tarasevich. Во судскиот процес на toxigenicity не може да се користи vkachestve контрола, производство вирус PW-8 и потребно е да периодично varianty.Kontrolny вирус passaged на krovyanomagare. За успешна идентификација на corynebacteria difteriikontrolny toxigenic вирус subcultured секој 1 - 2 sutok.METODIKI ДЕФИНИЦИИ PRIZNAKOVOPREDELENIE TSISTINAZNOY биохемиските активности (Пример Пиза) Corynebacterium дифтерија и corynebacteria ultserans, unlikefrom lozhnodifteriynoy Хофман и други прачки korineformnyhbaktery поседуваат ензимот tsistinazoy.Ispytuemuyu култура накалемени јамка "недоделкан" . Во pitatelnuyusredu за утврдување tsistinazy се излева во тесен height probirkistolbikom од 3 см на хранлива средина составот има цистин оцетна - киселина олово. Во produtsiruettsistinazu на раст култура, пресекување на tsistin- и формирана на etomserovodorod доведува во реакција со оцетна - киселина олово, сулфур во kotoryyprevraschaetsya - олово киселина - Соединение -Brown темна боја. Corynebacterium дифтерија и korinebakteriyultserans не само да предизвика оцрнуваат на медиумот за време на инјектирање, но iobrazuyut темен облак околу неа - кафеава narasstoyanii околу 1 см од средна површина. Reaktsiiuchityvayut Резултати од по 24 часа. Во присуство на повеќе dlyapolucheniya раст забрзана одговор (повеќе од 3 часа), култура износот на медиум inokuliruyutbolshim. Истовремено ispytuemymikulturami, сеење се изведува во контрола на вирус otdelnuyuprobirku.OPREDELENIE уреаза AKTIVNOSTILozhnodifteriynye Hoffmann coli, Corynebacterium ultserans inekotorye други микроорганизми од родот Corynebacterium за да се произведе obladayutsposobnostyu за време на раст irasscheplyat ензимот уреаза уреа. Corynebacterium дифтерија како способност neobladayut.Probu уреаза може да се стави во две варијанти - со metoduZakse (а) и со позлата на супа со уреа (б) .А) За методот уреаза Sachse extempore smeshivayut1 дел на средство и 19 делови на реагенсот Б. смесата се става во 0,1 ml uzkieprobirki изработка на една јамка и се тестира чиста kulturyso агар аранжман цевки или со Пиза медиум. За vydachiuskorennogo одговор во присуство на повеќе раст на плочата odnotipnyhkolony почетна сеење, колонии дозволено vnesenieneskolkih еден примерок цевка уреаза. Rezultatuchityvayut по инкубација во инкубатор во 37sh C за 30 min.b) чиста култура на Corynebacterium дифтерија во smochevinoy накалемени каша, се става во епрувети во 2 - 3 ml, и се става во инкубатор, како резултат на 24 часа на инкубација на 37sh C.Ferment уреаза се прилепува iuglekisloty уреа за да се формира амонијак. Ова ја зголемува pH на медиумот и се јавува izmenenietsveta индикатор (црвенило). Во отсуство на овој ензим issleduemoykultury, средни нема боење proiskhodit.Rekomenduetsya истовремено во посебна цевка, zasevatkontrolny shtamm.OPREDELENIE saccharolytic AKTIVNOSTIDlya идентификација Corynebacterium дифтерија takzheotsenku користат saccharolytic активност на изолирани култури за sredahGissa јаглехидрати - сахароза, гликоза, растворлив цевка krahmalom.Kazhduyu со средна Подсвиркват беше накалемени со 1 јамка chistoykultury. Резултатот на 24 часа, а во otritsatelnomkrahmalnom знак - се формира киселина, постои реставрација decolorized fuchsin и sredapriobretaet боја црвена по 48 часа на културата култури vtermostate на 37sh C.Pri ферментација на јаглени хидрати. Препорачани stavitprobu истовремено со контрола на вирус Corynebacterium дифтерија variantagravis.OPREDELENIE нитрат редуктаза AKTIVNOSTISposobnost Corynebacterium дифтерија врати soliazotnoy киселина (нитрат) во соли на азотен киселина (нитрити) е изборен функција која им овозможува differentsirovatkorinebaktery ultserans.Proizvodyat култура семе под студија во тест цевка со nitratnymbulonom, инкубираат за 24 часа во 37sh C.Zatem додаде 2 - 3 капки на реагенс за да се нитрит (Griess iliKasatkina ). Ако имаше формирањето на нитрит, sredaokrashivaetsya црвено. Ако не е obladaetnitratreduktazoy микроорганизам, средни нема промена на бојата proiskhodit.Odnovremenno со епрувети, инкубираат kontrolnuyuprobirku стерилни sredoy.5. SredyKachestvo хранливи медиуми култура е од суштинско значење кога lyubombakteriologicheskom студија. За да се постигне maksimalnoyvysevaemosti Corynebacterium дифтерија на материјалот за испитување, треба да се создаде оптимални услови за раст, репродукција etihbaktery зачувување на нивните биолошки својства, како и придружните dlyaingibirovaniya раст микрофлора. Тоа dostigaetsyaputem користи универзална хранливи материи бази со dobavleniemkrovi и калиум tellurite. Калиум tellurite во opredelennoykontsentratsii не го инхибираат растот на претставници rodakorinebaktery и скоро целосно го спречува среден раст се postoronneymikroflory.Krovyanyetelluritovye takzhedifferentsialno - дијагностички, како koloniikorinebaktery на овие медиуми имаат сива или црна боја (овие микроорганизми се способни да се врати калиум tellurite dometallicheskogo tellurium црна материја, и акумулира egovnutri клетки) .NPO "Хранлив медиумите"Махачкала suhuyuhinozolnuyu произведува диференцијал - дијагностички Среда Buchina dlyavydeleniya Corynebacterium дифтерија, кој е подготвен од страна на naetiketke рецепт дополнети со 5% во крвта (без dobavleniesyvorotki наместо крв). Buchina среда инфериорни krovyanymtelluritovym среда за инхибиторна активност и koloniivozbuditelya дифтерија може да се појави еден ден подоцна од nakrovyanyh telluritovyh средини. Во последниве години, prikladnoymikrobiologii Истражувачкиот институт (.. N Obolensk Москва регионот) произведува pitatelnuyusredu да се изолира Corynebacterium дифтерија - korinebakagar.Odnako, во споредба со крв telluritovymi средини dannoysrede да расте во 2 - 3 пати помали колонии korinebakteriydifterii.Uchityvaya погоре, сепак, pitatelnymisredami најдобро за примарна инокулација материјал се krovyanyetelluritovye медиум. Како основа за овие медиуми mozhnoispolzovat сува хранлив агар (СПА) НПО"Хранлив медиумите" (Махачкала) на хранлив агар osnovepankreaticheskogo хидролизат, риба оброк (РМ) производство GNIIPM (n. Obolensk). Хранлив агар се подготвени од страна на етикетата на рецепт iextempore додаде крв и tellurite kaliya.Dlya утврдување toxigenic својства corynebacteria difteriivypuskaetsya комерцијални сува среда OTDM (НВО "Pitatelnyesredy"... Махачкала) и GNIIPM (n Obolensk Москва регионот) медиуми податоци изготвени од страна на etiketke.Luchshey рецепт врз основа на подготовка на примероци од животната средина и за opredeleniyatoksigennosti Пиза останува отворен огниште пептон, kotoryygotovitsya во лабораторија или во одделенијата на исхраната srednekotoryh научно - истражувачка институции за prigotovleniyaMartenovskogo agara.Dlya напуштање на колонии и култивирање Corynebacterium услови дифтерија vlaboratornyh се подготват серум агар sredu.Primenenie серум е повлечен netseleso braznym.Kazhdaya нова серија на културата медиум (и комерцијални iprigotovlennoy ин витро) podlezhitbakteriologicheskomu контрола. Во случаите каде што хранлива средина rostovyesvoystva не ги задоволува predyavlyaemymtrebovaniyam, хранлив агар бази подготви супа -suhoy хранливи супа (СПб) произведени од страна на НПО "Pitatelnyesredy" (Махачкала), време-bulonproizvodstvaGNIIPM (n Obolensk.) - супа aminopeptide за микробиолошка tseleyproizvodstva кланици (градот Санкт Петербург, Армавир, Stavropol ') и супа, подготвени во лабораторија (Hottinger преглед, пептон 1% вода, aminnogoazota содржината 150 -. 180 mg /%) култура медиуми за почетна сеење слој chashkamPetri се излева во 3 - 4 mm. Тие може да се користи во techenie3 дена кога се чува на температура ПОДГОТОВКА 4sh C.METODY и хранливи материи МЕДИУМИ REAKTIVOVTRANSPORTNAYA медиуми (медиуми таложење) како основа за подготовка на транспортни sredyispolzuyut 0,1% хранлив агар на Hottinger вари или 0,1% агар комерцијална супа хранливи материи, pH 7,6.0,1% база агар се става во епрувети во 4 ml sterilizuyutv автоклав на 1 atm за 20 минути. време на чување - до 1 месец на 4sh C. Пред употреба, секоја цевка ssoblyudeniem стерилен техника, е додаден 0,5-1,0 добиток mL syvorotkikrupnogo и 0,05 ml (1 капка) 2% калиум rastvoratellurita. Селективно контрола на животната средина на стерилитет одржување на 37sh C за 48 часа. Рок на траење gotovoysredy - 10 дена во 4sh C.ZHIDKAYA хранливи материи медиум за цел изјава RNGAS дифтерија токсин индикација RNGA материјал chashkipervichnogo сеење накалемени во епрувета со течен медиум syvorotochnoypitatelnoy подготвена врз основа супа Мартин, ssoderzhaniem амин азот од 150 - 180 mg /% pH 7,6. Pitatelnyybulon става во епрувети во 3,5 ml, стерилизирани, со Автоклавирање pri1 банкомат. за 20 мин. рок на траење - до 1 месец. во temperature4sh C.Pered потрошувачката на секоја цевка во однос pravilaseptiki додаде 0.5 ml на говедски серумски i0,05 ml (1 капка) 2% раствор на калиум tellurite. Kontroliruyutna стерилен медиум и се чуваат во ист начин како и за основно semifluid transportnuyusredu.SREDY сеење испитување MATERIALASreda Clauberg IIK 100 ml на стерилна бази хранлив агар (pH 7,6), се стопи и лади до 50sh C, glitserinovoysmesi 10 ml, 50 ml "лак" Крв и 3 ml од 2% раствор на tellurite на kaliya.Prinimaya прифатена дека хранлива средина и razvoditsyaglitserinovoy смесата "лак" крв во 1,6 пати даден медиум priprigotovlenii треба да се зголеми мери suhogopitatelnogo агар пресметка 1,6 raza.Primer. На етикетата на ампулата со сува kommercheskimpitatelnym агар содржи измерен е потребно за prigotovleniyaodnogo литар на медиум D. За пример, 30 подготовка 1 litrapitatelnoy основа за Clauberg II средна треба да се земе navesku48 g (т.е. 30 g = 48 x 1,6 g) .На храна глицерин мешавина до 40 ml на крв или defibrinirovannoykrovi мешавина е додаден 20 ml на хемиски chistogosterilnogo глицерин (глицерол стерилизирани на температура 110sh ул Savanoriu за 30 мин.). за подготовка на "лак" Крв sterilnoydistillirovannoy до 34 ml на вода е додаден 16 ml од defibrinated krovi.KROVYaNOY TELLURITOVY агар (КТА) до 100 ml на стерилна бази хранлив агар (pH 7,6), се стопи и лади до 50sh C, е додаден 7 ml од 10 mldefibrinirovannoy или hemolyzed крв и 2ml 2% раствор на калиум tellurite. Наместо тоа, крвта може да се користи suhuyutelluritovuyu смесата (11 ml на 100 ml медиум), додека, во 100 mlKTA extempore додава 1 ml од 2% раствор на калиум tellurite, t.k.1 ml од 2% раствор веќе се содржани во крвта telluritovoysmesi 11 ml. Имајќи предвид дека хранлив медиум razvoditsyakrovyu за 1,1 пати, во подготовката на медиумот sleduetuvelichit мери хранлив агар пресметка на сува 1.1 raza.Primer. На етикетата на ампулата со сува kommercheskimpitatelnym агар содржи измерен е потребно за prigotovleniyaodnogo литар на медиум, на пример, 30 F. За подготовка на 1 litrapitatelnoy основа за CTA мора да се земе примерок од 33 g (т.е. 30 g x1,1 = 33 g) .METODIKA ПОДГОТОВКА KROVYANYHI KROVYANO - TELLURITOVYH SMESEYDlya подготовка на хранливи медиуми најдобрите ispolzovatdefibrikirovannuyu крвта на животните - говеда, коњи, свињи, овци, зајаци. Крв беа собрани во sterilnyesosudy со монистра со помош на специјално поставен систем асептично. Во некои случаи, крв беа собрани, nemontiruya специјални системи, спојување на првата крв оброк vnebutyli.Mozhno употреба на човечка крв истечен (цитрат и конзерванси) подготвува нив spetsialnyekrovyanye смеса. За таа цел неопходно е да се отстрани течноста chastotstoyavsheysya крв содржи натриум цитрат и конзерванси. Kostan еритроцитна маса во сад додадете sterilnyyfiziologichesky решение, со што може да се отстрани posleosedaniya еритроцити, и да додадете дестилирана вода dopervonachalnogo obema.Horoshim syremdlyapolucheniya крв мешавина sluzhiteritrotsitarnaya маса која може да остане кога proizvodstvegammaglobulina и други крвни продукти. На еритроцитите massedobavlyayut стерилна дестилирана вода по стапка од 1/3 obemaeritrotsitarnoy massy.Mozhno, исто така, го искористи преостанатото posleserologicheskih реакции (со негативен резултат на реакција) згрутчување на крвта, згрутчување или abortnoy плацентарната крв. Vsterilnye згрутчување собира шишиња со стаклени мониста и скршено стакло, а потоа одмрзнати, тогаш згрутчување лесно razbivayutsyabusami. Оваа постапка може да се повтори 2 - 3 пати. Потоа dobavlyayutsterilnuyu дестилирана вода по стапка од 1/4 од мешавина на крвниот волумен sgustkov.V подготвени од страна на над метод, калиум tellurite е додаден како конзерванс. За секои 10 mlkrovyanoy смесата се додава 1 ml од 2% раствор на калиум tellurite. Takuyukrovyano - telluritovuyu смеса може да се чуваат на 4sh C пресметка W2 mesyatsev.Primer. Освен ако не е супернатантот citrated крв obemom250 ml 50 е отстранета - 60 ml од течноста дел, а потоа neobhodimodobavit ист број - 50 - 60 ml sterilnogofiziologicheskogo решение, се промешува повторно да застане, при што се отстранат 50 - 60 ml од течноста дел и до 50 - 60 mlsterilnoy дестилирана вода. На тој начин ќе polucheno250 мл крв смеса. Тоа е потребно за зачувување dobavit25 ml 2% калиум tellurite (за секоја од 10 мл крв smesipribavlyayut 1 ml 2% калиум tellurite) .Во понатаму во подготовка на крв telluritovoy sredyna секои 100 ml на хранлив агар е додаден 11 ml krovyanoytelluritovoy мешавина (10 ml од мешавина на крвта и 1 ml rastvoratellurita 2% калиум). Extempore во таков медиум беше дополнително додаден 1 ml од 2% раствор kaliya.Prigotovlenie tellurite решение tellurite kaliyaDlya telluritovyh медиумот кој се користи подготвени kommercheskiy2% раствор tellurite kaliya.Pri отсуство на комерцијално достапна tellurite решение kaliyagotovyat следува: 100 ml дестилирана vodyrastvoryayut 2 g калиум кристален tellurite. За sterilizatsiirastvor загрева во врела вода бања за 30 мин. и да ја задржат pritemperature 4shC. Кристална калиум tellurite hranyatgermeticheski затворени банката темно stekla.SYVOROTOChNY AGARSyvorotochny агар се користи за скрининг на колонии ikultivirovaniya Corynebacterium дифтерија, може да бидат подготвени сакам доволно од горенаведените хранливи материи osnov.K 100 ml на стопена и ладење на температура 50sh Cpitatelnogo агар (pH 7,6) стерилни 10 ml syvorotkikrupnogo добиток. Медиумот се меша, се става vsterilnye цевки за да 4 - 5 ml, и ги постави во naklonnompolozhenii аранжман за секоја серија kotorogoproveryaetsya стерилност. Неколку цевки се поставени во текот на ноќта термостат. Во случај на ртење медиум е да ги отфрли сите набраздени partiya.Probirki серум агар се чува на 4sh C W2 nedel.MARTENOVSKY агар VODOYDVOYNOY KONTsENTRATsIIMartenovsky Месо пептон - 0,5 л, месо вода - 0,5 л, агар -agar - 15 g на оцетна - натриум киселина - 5 g, малтоза - 3 g.15 g агар мијат во текот на protochnoyvodoprovodnoy работен ден во вода, исцедена и внимателно префрлен во 1 lmartenovskogo супа (0,5 l огништето пептон и 0,5 l myasnoyvody). Приспособена pH 7,8 - 8.0 од алкализација bulona20% раствор на NaOH на хартија со крезол црвен индикатор, кој во оваа реакција ја менува бојата во жолта розова -malinovy. Чорбата е refluxed за 10 мин. потоа 0,5% (5 g на 1 L) оцетна - киселина натриум, 0,3% од малтоза (3 g на 1 L), pH е избрана и, доколку е потребно, се прилагодува се биде на 7.8 - 8.0, загреан . vtechenie 15 минути, е дозволено да стои на топло место (во возилото Кох термостат) на 2 - 3 часа и се филтрира преку памучна крпа или -marlevy филтер. Што се издаваат во стерилни ампули (70 - 80 ml) pribolshom обемот на работа или цевки (10 ml) и sterilizuyutodnokratno тече на пареа, за 30 min.Martenovsky peptonSvinye стомак, по можност поврзан со еластични ѕидови, големи количини на слуз и catarrhal симптоми без прочистен otzhira (стомаци импрегниран жолчката отфрлени), се сече iizmelchayut мелница. Како резултат на мелено стомакот поставени vbutyli капацитет од 3 - 5 л и загреан да се прелива 50sh C vodoyiz врз основа на 1 литар вода 300 - 500 g од бланширан маса. Постојат zhedobavlyayut 1% хемиски чисто хлороводородна киселина (специфична тежина 1,19). Маса меша добро и се стави во термостат, или на 15 -18 часа (или повеќе) во 37sh C- или, ако во otdelnogotermostata 42sh C, 18 часа (или повеќе). Во текот protsessaperevarivaniyabutyl потресена на прв почесто (по 1 до 1,5 часа), а потоа поретко. Ефикасно вари пептон butylilezhit мали долниот слој на парична казна темно osadka.Polnotu таложење баласт протеини може да се провери putemdobavleniya до 5 ml филтрирани пептон 1 - 2 капки 10% NaOH, матност не треба да poyavlyatsya.Deystvie ензим е запрен од страна на греење во водена бања, постепено зголемувајќи ја температурата 80sh C, popokazaniyu утврдени со термометар нурнати во шише perevarom.Nagrevanie продолжи за 10 мин. За таа цел, уредот mozhnoispolzovat Кох или автоклав. Tschatelnovzbaltyvayut шишиња, затворени со памук - газа со bumazhnymkolpachkom затка и го стави на ладно и суво место за otstaivaniyapri температура не повисока 12sh C. пептон употребливи neranee од 7 дена, кога цврсто се реши суспендиран chastitsy.Neobhodimo додадете 20 ml хлороформ до 1 l пептон dlyakonservirovaniya и затворете го шишето со гумена затка. Ова videpepton може да се чуваат без стерилизација на собна temperature.Myasnaya vodaDlya месо готвење вода двојна концентрација zhelatelnoispolzovat свежо месо млади животни upitannosti.Obezzhirennoe медиум ослободен од месо тетива помина cherezmyasorubku, истурете вода во 1 литар вода 1 кг мелено iostavlyayut во текот на ноќта 4sh C, смесата се загрева на утро asbestovoysetke за 15 - 20 мин. од моментот на вриење. Подготвен otvarfiltruyut, мелено исцеди, како резултат на месо се истура vsterilnye вода Шише 250 - 500 ml и стерилизирани течност parom3 последователни дена до 30 мин. Се чуваат на 4sh индикатор C.Bumazhki крезол krasnyy0,1 g крезол црвено се растворени во 100 ml од 95% алкохол на температура iostavlyayut 37sh C за 24 часа, често со тресење. Денот наследство е натопена во раствор filtrovalnoybumagi ленти и брзо се суши. Светла - жолта боја трудови во schelochnoysrede средствата во различни нијанси krasnogo.SREDY ЗА УТВРДУВАЊЕ TSISTINAZNOY AKTIVNOSTISreda Пиза на OHF agareK 90 мл на стопена 1,5% агар OHF (не е дозволена употреба Hottinger агар), pH 7,6, dobavlyayut2 ml 1% раствор на L -tsistina на 0.1N раствор на хлороводородна киселина (HCl), темелно се меша и на истиот волумен на 0.1N rastvoraNaOH за да го неутрализира киселина. Киселина и алкални раствори dolzhnybyt заемно titered, ispolzovatfiksanaly можат да бидат произведени од страна на хемиски promyshlennosti.Sredu стерилизирани на 112sh C за 30 минути, се чуваат за 1 месец на 4sh C.Agar со цистин се стопи на 90sh C (среден не се вари -. Dlyasohraneniya цистин). На ладење медиум е додадена 45sh C1-ml10 раствор% олово ацетат и 9 ml на добиток серум krupnogorogatogo асептично и шишиња poprobirkam.Neobhodimo се забележи дека кога температурата 50sh C и повисоко, во присуство на олово ацетат и серумски облачно sredapriobretaet млечниот боја. Тоа е тешко да дадат отчет rezultatovreaktsii.Sreda Пиза-базирани комерцијална околина AGVDlya Пиза медиум за готвење може да биде достапна за составот на комерцијалните isbalansirovannuyu АГВ медиум се користи vbakteriologicheskoy пракса за да се утврди chuvstvitelnostimikroorganizmov на антибиотици. Измерен дел од сува средина AGV vkolichestve 2,7 g е воведен во 90 ml дестилирана вода и греење doee целосно растворување. Подгответе 5% natriya.Dlya хидрогенкарбонат растворот се раствора 0,5 g на NaHCO во 10 ml дестилирана раствор vody.Zatem е додаден до 0,1 g на L-цистеин и загреана на polnogorastvoreniya цистин. Потоа 2 ml врела алкално rastvoratsistina воведени во 90 ml на растопен медиум AGV, pH прилагоди, и стерилизирани на do7,6 112sh C за 10 мин. За да стопена iohlazhdennoy 45sh да C преку сукцесивно додаде: 10 mlsyvorotki говеда, 1 ml од 10% rastvorauksusnokislogo олово, свежо подготвен 1.5 мл стерилна 10% раствор на натриум тиосулфат и се става во probirkam.Rastvory олово ацетат и натриум тиосулфат gotovyatextempore користење на стерилни цевки и дестилирана вода е стерилизиран со слевање на пареа или во вода бања за 30 min.Danny variantsredy Пиза otsutstviiMartenovskogo користи во агар. Odnakoneobhodimouchityvat, chtodifferentsialno - дијагностички својства на оваа средина comparisonwith средни подготвени на агар OHF помалку vyrazheny.SREDY ЗА УТВРДУВАЊЕ уреаза AKTIVNOSTIProbu уреаза може да се стави во две олицетворение: методот Sachse Iput инокулација на супа со mochevinoy.Prigotovlenie opredeleniyaureaznoy реагенси за активноста на метод ZakseGotovyat реагенс 2 - а и V.Reaktiv A: Уреа 2% етил алкохол G96 2 mlDistillirovannaya 4 mlReaktiv вода B: 0.2% раствор на fenolrot 1 mlOdnozameschenny калиум фосфат (KH PO) 0,1 R2 4Dv супституиран калиум фосфат (K HPO) 0,1 gHlorid натриум (Naci) 2 40.5 gDistillirovannaya voda100 mlReaktiv А не е стерилизиран и се чуваат во 4sh C.Reaktiv На автоклавен течен parom.Bulon mochevinoyK со 100 ml стерилен месо - или пептон Hottinger супа (pH 7,0) е додаден 1 g на уреа, и 0,2 ml од 1,6% алкохол rastvoraindikatora krezolrot. Истури во 2 - 3 ml во стерилни цевки стерилизирани, со која тече на пареа, за 10 min.SREDA ЗА УТВРДУВАЊЕ saccharolytic AKTIVNOSTIDlya утврдување saccharolytic активност rekomenduetsyaispolzovat средни 1% пептон vode.K 100 ml врела дестилирана вода е додаден 1 g на пептон, 0,5 g на хемиски чиста Naci, а индикаторот 1 ml Andrede.Ustanavlivayut pH 7,4, варени за 5 мин., филтрира низ филтер хартија ilipolotnyany, прилагоден на оригиналниот волумен goryacheydistillirovannoy вода. За таа е додаден еден основа izuglevodov сахароза, гликоза (1 g), скроб (0,5 g) .Меѓу става во епрувети во 2 - 3 ml и стерилизирани tekuchimparom за 3 дена до 30 мин. или на 0,5 банкомат. 30 мин. Gotovyesredy индикатор Andred се безбоен или малку rozovatyyottenok.Indikator AndredePosuda за подготовка на индикатор треба да биде сува, хемиски чиста, со земјата probkoy.K 100 ml дестилирана вода се додава 0,5 g на киселина fuksinai 16,4 ml на 4-проценти раствор на NaOH. Решението за еден ден ostavlyayutpri 37sh C, повремено протресување, два дена се чуваат nasvete а потоа и отстранети во темно место. Свежо подготвен rastvorimeet слама - жолта или малку розова боја, kotoryyischezaet време на складирањето. Кога интензивно - розова okraskerastvora за време на готвењето индикатор мора dobavitesche 1,6 мл од 4-проценти решение NaOH.SREDA ЗА УТВРДУВАЊЕ нитрат редуктаза AKTIVNOSTIK 100 мл супа хранливи материи (BCH или Hottinger супа) pH 7,3 - 7,5, без нитрити (проверка Grissaili Kasatkina реагенс) се додава 0,1 g на слободен nitratakaliya нитрит (kno). Проверете повторно за нитрит содржина po32 ml и се издаваат во хемиски чиста, сува епрувета. Медиумот беше стерилизирани 15 min.pri 120sh C.Reaktiv GrissaRastvor 1: 0.8% сулфанилна киселина во оцетна 5N kislote.Rastvor 2: 0.6% алфа-диметил-5N uksusnoykislote.Pered naftalamin во извршувањето на реакција мешавина еднакви волумени на решенија 1 и 2. реагенс погодни за употреба за 15 минути, безбоен, pripoyavlenii розова боење -. неупотребливи. Решенија 1 и 2 hranyatpri 4sh C за 2 mes.Reaktiv KasatkinaRastvor 1: 0,1% раствор во дестилирана rivanola vode.Rastvor 2: 12% раствор на хлороводородна киселина (HCI) .Prior вршење на реакција мешавина еднакви волумени на решенија 1 и 2. goden На реагенс за употреба во рок од 15 мин. Решенија 1 и 2hranyat во 4sh C за 2 mes.RETsEPTY KRASOK1. Алкални метилен-сино Lefflera.Distillirovannaya ML1 99% воден раствор на калиум хидроксид (KOH) 1 ml10% алкохолен раствор Метиленско сино 30 mlSmeshat. Дамка за 1 - 2 min.2. Оцетна siniy.Toluidinovy ​​толуидин сино gLedyanaya оцетна kislota2 ml96 0,5% етил алкохол 5 100 mlSmeshat mlDistillirovannaya вода. Дамка за 3 - 5 min.3. Кристално виолетова fioletovyy.Kristallichesky R5 0,25% раствор на оцетна киселина 100 mlSmeshat. Филтрира. Дамка за 5 - 7 min.METODY контрола на хранливи материи SREDBakteriologicheskomu контрола предмет pervichnogoposevamateriala средни и медиум за утврдување toxigenic, saccharolytic и биохемиски својства. Кога производство на sredvazhnym вртежен момент е прелиминарна контрола на медиум nasoderzhanie амин бази azota.METOD квантитативно определување на метод АМИНО AZOTAPrintsip е врз основа на блокирање на формалдехид во pH7,0 слободен амини и алкали титрација ekvivalentnogokolichestva карбоксилни групи. Проектот и да заврши titrovaniyaopredelyayut potentsiometricheski.Reaktivy: 1. Натриум хидроксид (NaOH) 0,1N rastvor.2. Хлороводородна киселина (HCI) 0,1N rastvor.4. Формалин (40% раствор на формалдехид). Пред kazhdymopredeleniem потребно да се донесе на pH на формалин 7,0.Hod opredeleniyaDlya анализа на дадена количина на течност примерок. Dlyazhidkih хидролизати со низок степен на варење (0.1 - 0.2% од амин азот) - 3 ml- со просечна степен на разделување (0,3 -0,6% амин оксид) - 1 ml- со висок степен на разделување (0.7 -1.3% амин оксид) - 0,5 ml- течен медиум за култивирање (0,08% -0,04 амин азот) - 3 ml- течни екстракти (0,02 -0,04% амин оксид) - 10 ml.V чаша од 50 ml од мострата за испитување и направи dovodyatobschy обемот на дестилирана вода до 20 ml. Elektrodypotentsiometra нурнати во растворот за тестирање и pHrastvora прилагоди на 7,0 со 0,1N NaOH 0,1N rastvoraHCl или решение. Потоа 2 ml на неутрален формалин и предизвика, без отстранување на електроди, содржината на примерокот се титрира со користење на 0,1Nrastvora NaOH за да pH 9,1. Во титрација треба да ispolzovatmikrobyuretku 5 ml.Soderzhanie амино азот во примерок во% (X) се пресметува со формулата: A x K x 1.4 x 100X = ----------------- , gdeB x 1000A - број на 0,1N раствор на NaOH во ml која отиде да titrovanieissleduemoy примерок K - на корекција за да се титар 0,1N NaOH-1,4 раствор - износот на амин азот во mg што е еквивалентно на 1 ml NaOH-100 0,1Nrastvora - фактор на конверзија во интерес-B - износ на течен примерок во милилитри земени за анализа-1000 - коефициент на конверзија mg g.METOD БАКТЕРИОЛОШКИ контрола на хранливи материи SREDV практично лаборатории за да се zhdaya серија култура медиуми, особено кога се користат нови бази (ililaboratornogo индустриско производство) и нови состојки podlezhitbakteriologicheskomu контрола се должи на нивната можна nestandartnosti.1. контрола на квалитетот на медиумите за сеење основно issleduemogomateriala поставени од страна на одредување на: a) ртење клетки Corynebacterium дифтерија-б) време за формирање на колонии) ingibiruyuscheyaktivnostiv почитуваат soputstvuyuscheymikroflory.S користи за оваа намена контрола toxigenic вирус ilisvezhevydelennye toxigenic култура Corynebacterium дифтерија stipichnymi културно - морфолошки својства shtammzolotistogo aureus (музейный или свежевыделенный).Суточные культуры коринебактерий дифтерии и стафилококка,вы ращенные на сывороточном агаре, смывают физиологическимраствором. Мутность полученной суспензии должна соответствовать10 ед. оптического стандарта мутности ГИСК им. Лос Анџелес Тарасевича(условно 1 млрд. бактериальных клеток в 1 мл взвеси). Из исходныхвзвесей культур коринебактерий дифтерии и стафилококка готовятпоследовательные разведения вфизиологическомрастворе(см. схему).СХЕМАПРИГОТОВЛЕНИЯ РАЗВЕДЕНИЙ КУЛЬТУРЫ КОРИНЕБАКТЕРИЙДИФТЕРИИ И СТАФИЛОКОККА+-----+-----------+---------------------------+------------------+| N | Кол-во | Объем вносимой | Условное кол-во ||про- | Fiziol. | суспензии, мл | микр. клеток ||бирки| р-ра, мл | | в 1 мл взвеси |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 8 || 1 |1,0| 1,0 из исходной взвеси| 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 7 || 2 |4,5| 0,5 из 1-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 6 || 3 |4,5| 0,5 из 2-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 5 || 4 |4,5| 0,5 из 3-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 4 || 5 |4,5| 0,5 из 4-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 3 || 6 |4,5| 0.5 
Сподели на социјални мрежи: 

 
Слични
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
» » » Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.