GuruHealthInfo.com

Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.

законот за здравство


Москва, Сојузна Центарот за санитарна инспекција на Министерството за здравство на Русија, 1999UtverzhdayuGlavny gosudarstvennyysanitarny vrachRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO23 октомври 1999 година воведување godaData во јануари 2000 година goda4.1 -1. МЕТОДИ НА КОНТРОЛА. ХЕМИСКИ FAKTORYOPREDELENIE МАСА KONTSENTRATSIIMIKOTOKSINOV во храна суровини и PRODUKTAHPITANIYA. Подготовка на примерокот METODOMTVERDOFAZNOY EKSTRAKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMUK 4.1.787-991. Развиена од страна на Сојузниот центар на Државниот санитарен и епидемиолошки MinzdravaRossii (ВБ Skachkov, IV Bragin, кралицата NV) и ЗАО"BioKhimMak CT" (Што доведува истражувач Vasiyarov GG, ГШ starshiynauchny вработен Alexeev, виш истражувач OsokinD.M., Доктор на хемиски науки Staroverov СМ.). 2. Одобрени и го стави во сила gosudarstvennymsanitarnym главен лекар на Руската Федерација од 23 Октомври, 1999 година Г.3. Vpervye.1 воведени. Цел и опсег primeneniyaNastoyaschie Metodicheskieukazaniyaustanavlivayutsposobypodgotovki примероци на храна суровини и храна produktovmetodom цврста фаза екстракција posleduyuschegohromatograficheskogo за микотоксин анализа и безбедносни студии се dlyaprovedeniyalaboratornyh pischevoyproduktsii gossanepidsluzhby институции на Руската Федерација, како и dlyapredpriyaty и институциите вклучени во контрола на квалитетот iissledovaniya храна суровини и прехранбени производи за конзистентност со SanPiN 2.3.2.560-96 "Kkachestvu хигиенски барања и безбедност на храна суровини и pischevyhproduktov" и акредитирани во согласност со воспоставените poryadke.2. Методот на подготовка probPodgotovka примероци ги вклучува следните делови: - екстракција тест објект обезбедување на екстракт poluchenieedinogo ги содржи сите микотоксини нормализира vdannom предмет на SanPin подготовка 2.3.2.560-96-- екстракт од примерок со екстракција vklyuchayuschayapredvaritelnuyuochistku цврста фаза, kontsentrirovanieiokonchatelnuyu прочистување на концентрирање касети Diapak.3 . Барања bezopasnostiPri реагенси, растворувачи и veschestvamineobhodimo во согласност со барањата за безбедност формирана dlyaraboty токсични, корозивни и запаливи супстанции POGOST 12.1.005-88.4. Услови за подготовка probProtsessy вршење на подготовка и обработка на примероци раствор врши vnormalnyh услови на температура од 18 - 22grad. С.5. Афлатоксин Б1 (АП-B1), зеараленон (ЗоН), деоксиниваленол (DON) и на T-2 токсин (T-2) 5.1. Опрема, материјали, reaktivyTablitsa 1 + ------------------------------------ + ------ --- --------- + + + + --- --- | Опрема, материјали, реагенси | AT-B1 | ЗоН | DON | 2 || T и решенија + ---- + ---- + ---- + ---- + | ||| 1 | 2 | 1 | 2 | | ||| var. | Var. | Var. | Var. | | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | тип мешалка примероци | + || АВУ-6C ТУ 64-1-2451-78 или магнетни | || -magnetic или механичка мешалка | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | аналитичка вага со точност од | + || се мери 0.01 g +/- | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | тип Мил "циклон" КК-114 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | ротационен испарувач (TS-1м2, | + || W или 25-1173.102-84 al.) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | уред за вакуум | + || за -0.7 mmHg (Waterjet | || пумпа, вакуум пумпа нафта, | || Медицински аспиратор) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | вакуум уред за обука | + || примероци (вакуум водот), со приемници | || прекари судењето капацитет не помал од | || 10 кубни. види | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | уред за испарување примероци | + | + | - | - | - | - || проток на азот под греење околу ||||| | || 40 степени. C (сув воздух е пожелно ||||| | || бања) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak А-3, | + | + | + | + | + | + || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak Ау-3 | - | - | - | - | + | + || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak P-3 | + | + | + | + | - | - || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak H, | + | - | + | - | + | + || ТУ 4215-002-05451931-94, ЗАО ||||| | ||"BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak C, | - | + | - | + | - | - || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | медицински клешти, 15 cm | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | метални шпатула или порцелан | + || лажица | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | рамно дно колба со конусна | + | + | + | + | - | - || стопери со капацитет од 50 кубни метри. см ||||| | || GOST 25.336 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | рамно дно конусна колба | + || (колба) vmestimos- конгестија | || Tew 250 или 300 cc. cm | || GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Бихнер колба со капацитет од 500 кубни метри. | + || Види | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Инка Bunsen капацитет | + || 200 кубни. види | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Инка одвојување капацитет | + || 250 кубни. види GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ostrodonnye колби со затки на | + || GOST 25336 размен konu- | || сом 14/23 капацитет од 5, 10 | || 25 кубни. види | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | облик на круша колби со затки на | + | + | + | + | - | - || GOST 25.336 со заменливи konu- ||||| | || сом 14/23 капацитет од 10 и 25 кубни метри. ||||| | || види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | мерење на цилиндри, со капацитет од 25, 50, | + || 100 кубни. см 2 клетки, во согласност со GOST 1770 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | микрошприц со капацитет од 100 кубни метри. mm | + || (или пипета дипломирал GOST | || 20292 извршување на 4 или 5, 1 classifica-. | || СА капацитет точност од 1 вв) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | филтер-хартија (густа, тесни || - || - | + | + || koporistaya полека филтрирање ||||| | | | тип тенка талог "сина ||||| | || наслови") ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | нестерилизирани медицински памук, | + || x / b | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ацетонитрил за течна хроматографија | + || graphy, ОП-3 OFS Ту | || 6-09-14-2167-84, пречистена | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Ацетон, висока чистота, според ТУ 6-09-3513-75 | - | + | - | - | - | - || OP-2, исправена ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | бензен, реагенс одделение, во согласност со GOST 5955-75, vyder- | + | + | + | + | - | - || zhanny над Na ПА, пречистена ||||| | || Април 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | хептан, хексан, xQ, ТУ | + | + | + | + | - | - || 6-09-3375-78 или нафтени етер ||||| | || (дел 70 - 100), реагенс одделение, ||||| | Коригира || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2-пропанол (изопропил алкохол), | - | - | - | - | + | + || xQ, ТУ 6-09-402-75, ||||| | Коригира || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | глацијална оцетна киселина, XV, во | + | + | + | + | - | - || GOST 61-75 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | хлороформ, медицински, одржан | - | - | - | - | + | + || над CaCl, пречистена ||||| | || 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | метилен хлорид (дихлорометан), | + | + | - | - | - | - || одржан во текот CaCl, ||||| | || 2 ||||| | Коригира || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | диетил етер, одржан во текот | - | + | - | - | - | - || NaOH, исправена ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | етил ацетат (етил ацетат + || || - || - || киселина), реагенс одделение, во согласност со GOST 22.300-76, || ||| | || одржан во текот Na CO и rektifitsi- ||||| | || 3 февруари ||||| | Роуан || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | натриум сулфат, безводен, реагенс одделение, на | + | + | + | + | - | - || GOST 4166-76 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | натриум хлорид, реагенс одделение, во согласност со GOST 4233-77 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | дестилирана вода | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | екстракција - 84% ацетонитрил во VO | + || де, 840 кубни метри. Види ацетонитрил dovo- | || dyatsya на 1 литар вода или polucha- | || etsya со дестилација со вода воден | || но - ацетонитрил смесата (1: 4) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | 33% бензен во ацетонитрил - микс | + | + | + | + | - | - || 30 кубни. Види бензен и 60 кубни метри. Види ацетон ||||| | || tonitrila (1: 2) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 20% ацетонитрил во бензен - 20 кубни |. + | - | - | - | - | - || cm ацетонитрил разредена бензен ||||| | || до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2% раствор на оцетна киселина во бензен - 2 | - | - | + | - | - | - || сертификати. види разредена оцетна киселина ||||| | || бензен до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 5% раствор на оцетна киселина во бензен - 5 | - | + | - | - | - | - || сертификати. види разредена оцетна киселина ||||| | || бензен до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% етил ацетат во бензен - 10 кубни. | - | + | - | + | - | - || cm ацетат разредена со бензен да ||||| | || 100 кубни. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | 25% од хексан во воздухот - 25 кубни. види | - | + | - | - | - | - || хексан разредена со диетил етер ||||| | || до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% ацетон во дихлорометан - 10 кубни. | - | + | - | - | - | - || cm ацетон разредена со дихлорометан ||||| | || до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 20% ацетон во дихлорометан - 20 кубни |. - | - | - | - | + | - || cm ацетон разредена со дихлорометан ||||| | || до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- --- + + 5.2. Методот на подготовка probOpredelyaemye микотоксини обнови екстракција од примерокот маса prisootnoshenii примерок - обемот на екстракција од 1: 5. Кога opredeleniiaflatoksina B1 и зеараленон е прочистен воден екстракт на -atsetonitrilnogo Чак Diapak A-3 на касетата kontsentriruyutmikotoksiny Diapak P-3, сушени со испарување остаток на вода и redissolution iposle врши завршно ochistkuna Чак Diapak H (Diapak C - во случај на пченка и производи iznee ). се добиени фракционо елуирање две фракции, soderzhaschieaflatoksin B1 и зеараленон, подготвени за хроматографски определување на деоксиниваленол analizu.Pri и T-2 токсин provodyatpredvaritelnuyu чистење на вода - ацетонитрил екстракт napatrone Diapak Ау-3 и концентрирани со испарување на сувост. Poslepererastvoreniya конечниот прочистување се врши на DiapakN кертриџот. Фракционо елуирање се добиени две фракции, soderzhaschiedezoksinivalenol и T-2 токсин, подготвени да степен hromatograficheskomuanalizu.Dlya потврдување на подготовка на мострата iutochneniya екстракција микотоксини ги анализира probymetodom стандард адитиви на оригиналниот екстракт. подготовка Osnovnyeharakteristiki примерок од цврст ekstraktsiiprivedeny во табела. 2. Табела 2OSNOVNYE подготовка КАРАКТЕРИСТИКИ примерок + ---------------- + --------------- + --------- - + ------------------- + | Микотоксин | Време | Степен | роднина ||| probopod- | екстракција, | просек kvadratiche- ||| готвење мин. | % | Skoe отстапување,% | + ---------------- + --------------- + --------- - + ------------------- + | Афлатоксин Б1 | 120 | 75 | 20 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | зеараленон | 120 | 70 | 20 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | деоксиниваленол | 90 | 85 | 10 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + | Т-2 токсин | 90 | 85 | 10 | + ---------------- + --------------- + ----------- + - ----------------- + за да се постигне потребниот степен на екстракција tochnovypolnyat барања за квалификации за органски растворувачи и ihpodgotovke подготвува решенија наведени во ДИК. 5.1.Algoritm пребарување за можните загуби на целни примероци микотоксини pripodgotovke е даден во Прилог 1 на овој Metodicheskimukazaniyam.5.3. Подготовка концентрира patronovPatrony Diapak се пластични колона содржи 1 или 3 кубни метри. cm sorbenta.5.3.1 херметички спакувани. A редење кертриџ Diapak-3Vskryt излез линија кертриџ Diapak А-3, отстранување на polimernuyuzaglushku. Поставете кертриџ исправено тесни kontsomvniz соодветен уред за собирање и евакуација elyuata.Ostorozhno отворете го капакот полимерни кертриџ да формираат горниот слој на цврста rovnyygorizontalny прислушување popatronu и поправете го, со помош на мала памук tampona.Podklyuchit вакуум апарат за евакуација на вакуум и да obespechitpodachu кертриџ .Kontsentriruyuschy кертриџ Diapak А-3 за еднократна употреба не iregeneratsii podlezhit.5.3.2. Концентрирајќи кертриџ Diapak Ау-3Podgotovka се концентрира кертриџ Diapak Ау-3 provoditsyaanalogichno n. 5.3.1.Kontsentriruyuschy кертриџ Diapak Ау-3 за еднократна употреба iregeneratsii не podlezhit.5.3.3. Концентрирајќи кертриџ Diapak P-3Set кертриџ Diapak P-3 во вертикално podhodyascheeustroystvo за вакуум и се отвори на врвот kryshku.Suspendirovat цврста додека мешајќи со стаклена прачка во 10kub. Види бензен, се остава да отстои цврста и Мис на slabomvakuume спречува навлегување на воздух во цврста posledovatelnopo 10 кубни. cm на бензен и ацетон atsetona.Sohraniv слој од околу 2 cm, да се воведе порозна polimernyyfiltr (достапни во комплет) и печат стапче verhnemusloyusorbenta.Zatempropustit преостанатите ацетон и последователно со 10 сс. cm екстракција и екстракција -water смесата (1: 1), спречување на навлегувањето на воздух во цврста со skorostyu2 - 3 капки sekundu.Sohraniv слој елуент трае околу 2 cm, се оневозможи вакуум муфел првиот кертриџ горниот капак, а потоа (posleprekrascheniya капка по капка) и на дното паниката. Така кертриџ болест подготвени може да се чуваат во текот на работен ден, и суши prisluchaynom е во работна состојба prokachivaniem10 коцка. cm екстракција мешавина - вода (1: 1) .Kontsentriruyuschy кертриџ Diapak P-3 еднократно шема регенерација ipodlezhit, како што е опишано погоре, по provedeniyaprobopodgotovki.5.3.4. Концентрирајќи Diapak NSnyat глава за дупчење со глава за дупчење Diapak H приклучоци за да се помине низ него со помош на 5 сс шприц. види бензен и печат двата краја така patrona.Podgotovlenny кертриџ може да се чуваат во techeniesutok на температура не повисока од 25 степени. C.Kontsentriruyuschy кертриџ Diapak H еднократно ipodlezhit регенерација следниве шеми по provedeniyaprobopodgotovki: - по подготовка на DT на примерок - секвенцијално прескокнете cherezpatron 5 кубни. cm на етанол, ацетон и по подготовка на примероци benzola-- AZ - секвенцијално прескокнете cherezpatron 5 кубни. cm ацетон и benzola.5.3.5. Концентрирајќи Diapak SSnyat кертриџ со кертриџ C Diapak приклучоци за да помине низ него со помош на 5 сс шприц. види бензен и печат двата краја така patrona.Podgotovlenny кертриџ може да се чуваат во techeniesutok на температура не повисока од 25 степени. C.Kontsentriruyuschy кертриџ Diapak C не за еднократна употреба iregeneratsii podlezhit.5.4. Екстракција mikotoksinov5.4.1. Жито и zernoprodukty25 g бланширан примерок префрлен во конусна колба и zalit125 коцка. Види екстракција. Спроведат интензивни peremeshivaniesoderzhimogo колба повеќе од 30 мин. Екстракт филтер cherezbumazhny филтер "синиот".5.4.2. Ореви и маслодајно семе kultur25 гр мелени примерок префрлен во ерленмаер колба dobavit125 коцка. Види екстракција и 40 кубни метри. види хексан. Изведување intensivnoeperemeshivanie содржина колба за 30 минути. Posleperemeshivaniya се додаде за да се извлече 1 g натриум хлорид и prodolzhitperemeshivanie за 5 мин. Филтрира низ филтер хартија"синиот". Филтрираниот екстракт беше префрлен на решение и по delitelnuyuvoronku пакет соберат -atsetonitrilny долниот воден слој. екстракт ацетонитрил degrease 25 cc од хексан во одделителна инка со капацитет од 250 кубни метри. sm.Ekstrakt префрлен во одделителна инка, се додаваат 25 cc од хептан и се промешува енергично. По вода поделба sobratnizhny - ацетонитрил ekstrakt.5.4.3. Масло rastitelnoe25 гр масло префрлен во една Ерленмаерова колба, додадете 40 кубика. smgeksana и 125 кубни метри. Види екстракција. Изведување intensivnoeperemeshivanie содржина колба за 30 минути. Posleperemeshivaniya да се направи екстракт од 0.2 g NaCl iprodolzhit мешање за 3 - 5 мин. Екстрактот бил префрлен vdelitelnuyu инка и по demixing соберат долниот слој на вода и ацетонитрил. екстракт ацетонитрил degrease 25kub. види хексан или хептан или нафтени етер delitelnoyvoronke капацитет од 250 кубни. sm.Ekstrakt префрлен во одделителна инка, се додаваат 25 cc од хептан и се промешува енергично. По вода поделба sobratnizhny - ацетонитрил ekstrakt.5.5. Прочистување и концентрација prob5.5.1. Прочистување и концентрација на примерокот на opredeleniiaflatoksina B1 и zearalenona5.5.1.1. Прелиминарните прочистување и концентрација proby25 коцка. cm одмастена екстракт поминале низ patronDiapak А-3 со брзина од 2 - 3 капки во секунда и 20 cc изберете elyuata.Poluchenny елуатот волумен од 20 кубни метри. види разредува еднакви obemomvody. На добиениот раствор беше донесен преку кертриџ Diapak soskorostyu P-3 1 - 2 капки во секунда, а потоа на кертриџ беше измиен со 5 сс на вода и прочистен со воздух за 1 min.Tselevuyu fraktsiyuelyuirovatspatronaDiapakP 3posledovatelno 7-коцка. ацетонитрил и 7 cm коцка. 33 cm protsentnogobenzola ацетонитрил - со брзина од 1 - 2 капки sekundu.Sobranny елуатот беше донесен преку коритото на безводен раствор на натриум сулфат (10 g) од страна на гравитација. На шишето е да се исплакнат со 2 кубика. 33 cm protsentnogobenzola во ацетонитрил, и на содржината префрлен во истиот sloybezvodnogo натриум сулфат. Измијте натриум сулфат 3 CU. sm33 проценти бензен во ацетонитрил. На суво uparitdosuha филтратот на ротациона испарувачот на температура не повисока од 40 grad.C и веднаш се раствора со 0,5 кубика. Види benzola.5.5.1.2. Завршно прочистување на кертриџ Diapak H (варијанта 1) раствор на бензен беше применета на кертриџ predvaritelnokonditsionirovanny Diapak N. колба содржат suhoyostatok, миење 2 повеќе пати со 0,5 кубни. види бензен и последователно се применуваат решенија на калемот Diapak N. Сите миење spatrona otbrosit.Zearalenon елуира од касетата Diapak H 4 коцка. cm2 проценти оцетна киселина во бензен и испарува да сувост (doischeznoveniya мирис на оцетна киселина) во ротациона isparitelepri температура не повисока од 50 степени. C (Пример H). Хемиско ostatoknemedlenno реконституира во sootvetstvuyuschemkonechnomu растворувач хроматографски opredeleniyu.Zatem се елуира афлатоксин Б1 5 сс. 20 cm protsentnogoatsetonitrila во бензен кертриџ и испарува да сувост во азотен прилив pritemperature не повисока од 40 степени. C (Пример A). Материи nemedlennopererastvoritvrastvoritele соодветните konechnomuhromatograficheskomu opredeleniyu.Ekvivalent тежината на примерокот земен за анализа на афлатоксин Б1, МНР, - 4 g.Ekvivalent тежината на примерокот земен за анализа зеараленон, МНР, - 4g.5.5.1.3. Завршно прочистување на кертриџ Diapak C (варијанта 2) Погодно за пченка и производи од растворот nee.Benzolny беше применета на кертриџ predvaritelnokonditsionirovanny Diapak S. колба содржат suhoyostatok, миење 2 повеќе пати со 0,5 кубни. се однесуваат на бензен и nanestirastvory Diapak кертриџ C кога на горниот ниво на претходниот раствор filtrapatrona делови. Сите перења со patronaotbrosit.Zearalenon Diapak елуира од касетата со 6 кубни метри. sm10 проценти етил ацетат во бензен и испарува да сувост (doischeznoveniya мирис бензен) во ротациона испарувачот pritemperature не повисока од 50 степени. C (Пример H). Материи nemedlennopererastvoritvrastvoritele соодветните konechnomuhromatograficheskomu opredeleniyu.Zatem Diapak преку кертриџ C 3 CC постојано пропушти 5 отсто оцетна киселина во бензен и 4 кубика. sm25 проценти од хексан во воздухот. Сите eluates се отфрлени. AflatoksinV1 елуира од касетата 6 CU. cm 10 проценти ацетон vdihlormetane. Елуатот беше испарува до суво под струја од азот на температура од 40 степени nevyshe. C (Пример A). Материи веднаш pererastvoritv растворувач соодветни крајот hromatograficheskomuopredeleniyu.Ekvivalent масата на примерокот земен на анализа на афлатоксин Б1, МНР, - 4 g.Ekvivalent тежината на примерокот земен за анализа зеараленон, МНР, - 4g.5.5.2. Прочистување и концентрација на примерокот на opredeleniidezoksinivalenola и T-2 toksina5.5.2.1. Прелиминарните прочистување и концентрација proby20 коцка. види ја извадиме да помине низ кертриџ Diapak Ау-3 soskorostyu 2 - 3 капки во секунда. Елуатот се собрани. Исплакнете 5kub кертриџ. cm екстракција и филтер на комбинираната eluates vserdtsevidnuyu шишето исплакнат 2 филтер коцка. cm ацетонитрил sobirayapromyvochnuyu течноста во садот. Rotatsionnomisparitele испарува до сушење на температура од околу 60 - 70 степени. C. Uparivaniepovtorit 2 - 3 пати со додавање на шишето 3 - 5 CC. smpropanola-2 или ацетонитрил до исчезнувањето на капки вода Nastenko колба (примерок DT) .5.5.2.2. Завршно чистење на кертриџот Diapak NProbu DT растворени во 0,5 кубика. cm хлороформ и се применува napredvaritelno условен кертриџ Diapak N. obmytesche шишето со 2 пати 0,5 кубни. cm nanestirastvory хлороформ и сукцесивно на истата глава за дупчење, почнувајќи собирање на фракции кои содржат T 2toksin во колба со соголување. Комплетниот елуирање на T-2 токсин 2 cc на хлороформ во садот. Елуатот беше испарува до суво на rotatsionnomisparitele на 40 - 45 степени. C и се реконституира vrastvoritele соодветниот крај hromatograficheskomuopredeleniyu T-2 токсин (Пример T) .Dezoksinivalenol елуира од касетата на другите полнењето kolbu6 коцка. види 20 проценти ацетон во хлороформ. Uparitdosuha елуатот на ротациона испарувачот на температура од 40 - 45 степени. Ipererastvorit C во растворувач, sootvetstvuyuschemkonechnomuhromatograficheskomu определување на деоксиниваленол (Пример D) .Ekvivalent тежината на примерокот земен за анализа на деоксиниваленол, МНР, - 4 g.Ekvivalent тежината на примерокот земен за анализа на T-2 токсин, МНР, - 4g.6. M16.1 афлатоксин. Опрема, материјали, реагенси + -------------------------------------------- - + ----------------- + | IR ротациони испарувачот или единица 1m2 | ТУ 25-1173.102-84 || да испарува примероци во азот за греење | или други . || СРИ околу 40 степени. C | || TSLN центрифуга тип 2 или слични | W || 5-375-4171-73 апарат да се создаде вакуум од -0.7 mm | || Hg. (Вода-авион пумпа, вакуум нафта | || пумпа, медицински вшмукување уред) | || вакуум уред за подготовка на примероци (Ba | || Повеќекратни вакуум), со приемници vmesti- судење | || мостот не е помалку од 10 кубни метри. види | || Концентрирајќи кертриџ Diapak S16M, | ТУ 4215-002 - || компанијата "BioKhimMak CT"| 05451931-94 || Концентрирајќи кертриџ Diapak C, | ТУ 4215-002 - || компанијата "BioKhimMak CT"| 05451931-94 || медицински клешти, 15 cm | || шприц капацитет од 10 или 20 кубни метри. Види Луер | || рамно дно конусни колби со затки, | || GOST 25336 со капацитет од 50 кубни метри. види | || ostrodonnye колби со затки, со заменливи | GOST 25336 || со директно конус 14/23 со капацитет од 10 или 25 кубни метри. | || Види | || во облик на круша колби со затки, со заменливи | GOST 25336 || со директно конус 14/23 со капацитет од 25 кубни метри. види | || мерење на цилиндри, со капацитет од 50 кубни метри. Види, | GOST 1770 || 2 клетки, или епрувета дипломирал vmestimos-. | || Tew 15 или 20 кубни метри. види | || микрошприц со капацитет од 100 кубни метри. мм или pipet- | GOST 20292 || Ка дипломирал извршување на 4 или 5, класа 1 | || точноста капацитет од 1 кубни. види | || нестерилизирани медицински памук, тој / b | || ацетонитрил за течна хроматографија, | W 6-09-14 - || OP-3, OFS, исправена или | 2167-84 || ацетонитрил, 1 одделение соработка "Kriohrom", | || r. Светец - Петербург | || Ацетон, OFS, OP-2, исправена | || ТУ 6-09-3513-75 хептан, хексан, XV, или нафтени етер (mar- | ТУ 6-09-3375-78 || ки 70-100) , пречистена | || лимонска киселина, 1-вода, аналитичка чистота | GOST 3652-29 || натриум хлорид, реагенс одделение | || GOST 4233-66 хлороформ медицински, одржан во текот CaCl | || 2 | || коригира | || натриум сулфат, безводен, реагенс одделение | GOST 4166-76 || дестилирана вода | | + ---------------------------------------------- + - ---------------- + 20% ацетон во хлороформ - до 20 кубни. ацетон dobavithloroform cm до 100 кубни. се однесуваат на вкупниот или 5% метанол vhloroforme - до 20 кубни. додадете 5 см хлороформ коцка. cm од метанол да се донесе волумен на растворот до 100 cc хлороформ. sm.6.2. Методот на подготовка на М1 probAflatoksin отстрани од течен примерок млеко преку propuskaniemee на касетата Diapak S16M. На дел содржи aflatoksinM1, кој се елуира со хлороформ и кертриџ, по сушењето iuparivaniya, завршно прочистување се врши на касетата Diapak S.Podgotovlennaya примерок подготвен за хроматографски analizu.Aflatoksin М1 на крем и млеко пијалоци ekstragiruyuthloroformom во присуство на натриум хлорид и лимонска киселина за конзистентност со MU N 4082-86 <*> и, после высушивания и упаривания,проводят окончательную очистку на патроне Диапак С.--------------------------------<*> Методические указания по обнаружению, идентификации иопределению содержания афлатоксинов в продовольственном сырье ипищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостнойхроматографии. Утв. МЗ СССР 20.03.86 N 4082-86.Для проверки правильности проведения пробоподготовки иуточнения степени извлечения микотоксинов проводят анализ методомстандартной добавки в исходный экстракт.Время проведения пробоподготовки - 60 мин. Степень извлечения<*> - 80%. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10%.--------------------------------<*> При снижении степени извлечения афлатоксина М1 см.Приложение 1.6.3. Подготовка концентрирующих патронов6.3.1. Концентрирующий патрон Диапак С16МСнять с патрона Диапак С16М заглушки и пропустить через него спомощью шприца последовательно по 5 куб. см ацетонитрила и воды.Заглушить оба конца патрона. Подготовленный таким образом патронможет храниться в течение суток при температуре не выше 25 град.C.Концентрирующий патрон Диапак С16М одноразового применения ирегенерации не подлежит.6.3.2. Концентрирующий патрон Диапак ССнять с патрона Диапак С заглушки и пропустить через него спомощью шприца 5 куб. см бензола и заглушить оба конца патрона.Подготовленный таким образом патрон может храниться в течениесуток при температуре не выше 25 град. C.Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения ирегенерации не подлежит.6.4. Подготовка проб молочных продуктов к анализу6.4.1. Подготовка, концентрирование и очисткапроб молокаПробу молока 50 куб. см центрифугировать на подходящемоборудовании в течение 5 мин. при 1000 об./мин. Для определенияафлатоксина М1 отобрать 20 куб. см супернатанта, избегая попаданияжира.Сухое молоко растворяется в соответствии с инструкцией илисоответствующим ТУ и обрабатывается, как описано выше.20 куб. см подогретой до 40 град. C подготовленной пробымолока пропустить через предварительно подготовленный патронДиапак С16М со скоростью 3 капли в секунду. Затем патрон промыть 5куб. см дистиллированной воды и высушить продуванием воздуха втечение 1 мин. Элюаты отбросить. Патрон промыть 10 куб. см гексанаи вновь высушить воздухом в течение 1 мин.Афлатоксин М1 элюировать 6 куб. см хлороформа. Собранный элюатпропустить самотеком через слой безводного сульфата натрия (3 куб.см). Колбу обмыть 1 куб. см хлороформа, и содержимое перенести натот же слой безводного сульфата натрия. Хлороформные растворысобрать (Экстракт М).6.4.2. Подготовка проб сметаны и кисломолочныхпродуктовВ коническую колбу вместимостью 250 куб. см помещают навеску20,0 г сметаны или 40 куб. см кисломолочного напитка. Затем тудаже вносят 10,0 куб. см водного раствора 2 г хлорида натрия и 0,24г лимонной кислоты и 100 куб. см хлороформа (все составные частипредварительно подогревают до температуры 35 - 38 град. C).Содержимое колбы встряхивают 2 - 3 мин., переносят в центрифужныестаканы и центрифугируют 15 мин. при 3000 - 4000 об./мин. Отделяютнижний хлороформный слой, высушивают над 10 г безводного сульфатанатрия, отфильтровывают, измеряют объем фильтрата (V ) и упариваютфдо 5 - 6 куб. см (Экстракт М).6.5. Окончательная очистка пробыЭкстракт М нанести на патрон Диапак С со скоростью 3 - 4 каплив секунду. Промыть сульфат натрия 1 куб. см хлороформа, и растворнанести на патрон Диапак С при достижении верхнего фильтра патронауровнем предыдущей порции раствора.Афлатоксин М1 элюировать с патрона 10 куб. см 20-процентногоацетона в хлороформе или 7 куб. см 5-процентного метанола вхлороформе. Элюат собрать и упарить досуха на ротационномиспарителе или в слабом токе азота при температуре не выше 40град. C. Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе,соответствующем конечному хроматографическому определению (ПробаМ).Эквивалент массы пробы молока, взятой на анализ афлатоксинаМ1, М , - 20 г.прЭквивалент массы пробы сухого молока рассчитывается поформуле:mМ = --- x 20, (6.1)прVгде:М - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прm - масса пробы сухого молока, г-V - объем воды для растворения пробы сухого молока, куб. см.Эквивалент массы пробы сметаны или кисломолочных напитков,взятой на анализ, рассчитывается по формуле:VфM = --- x m ,(6.2)пр 100пргде:M - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прV - объем фильтрата, куб. см-фm - масса (объем) пробы сметаны или кисломолочных напитков,прг (куб. см).7. Патулин7.1. Оборудование, материалы, реактивы+----------------------------------------------+-----------------+|Испаритель ротационный ИР-1М2 |ТУ 25-1173.102 - || |84 или др. ||Центрифуга типа ЦЛН-2 или аналогичная |ТУ 5-375-4171-73 ||Устройство для создания вакуума около -0,7 мм | ||рт.ст. (водоструйный насос, масляный вакуумный| ||насос, медицинский отсасыватель) | ||Вакуумное устройство для подготовки проб (ва- | ||куумный манифолд), с приемниками проб вмести- | ||мостью не менее 10 куб. см| ||Устройство для упаривания проб в токе азота | ||при нагревании около 40 град. C (желательно | ||суховоздушная баня) | ||Концентрирующий патрон Диапак П-3,|ТУ 4215-002 -||ЗАО "БиоХимМак СТ"|05451931-94 ||Концентрирующий патрон Диапак С, |ТУ 4215-002 -||ЗАО "БиоХимМак СТ"|05451931-94 ||Пинцет медицинский, 15 см | ||Колбы плоскодонные конические с пробками вмес-|ГОСТ 25336 ||тимостью 50 куб. см | ||Колбы остродонные с пробками с взаимозаменяе- |ГОСТ 25336 ||мым конусом 14/23 вместимостью 5, 10 или 25 | ||куб. см | ||Колбы грушевидные с пробками с взаимозаменяе- |ГОСТ 25336 ||мым конусом 14/23 вместимостью 25 куб. см | ||Пробирка градуированная вместимостью 15 или 20|ГОСТ 1770||куб. см | ||Цилиндры мерные вместимостью 10 и 50 куб. см, |ГОСТ 1770||2 кл. | ||Микрошприц вместимостью 100 куб. мм (или пи- |ГОСТ 20292 ||петка с делениями исполнения 4 или 5, 1-го| ||класса точности вместимостью 1 куб. см) | ||Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ | ||Вата медицинская нестерилизованная, х/б | ||Ацетат цинка 2-водный, чда|ГОСТ 5823||Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, |ТУ 6-09-14 - ||ОП-3 осч, ректифицированный |2167-84 ||Ацетон, осч, ректифицированный, ОП-2 |ТУ 6-09-3513-75 ||Бензол, хч, ректифицированный |ГОСТ 5955-75 ||Гексацианоферат II калия (калий железистосине-|ГОСТ 4207||родистый) 3-водный, хч| ||Гептан, гексан, хч или петролейный эфир |ТУ 6-09-3375-78 ||(фракция 70-100), хч, ректифицированный | ||Хлороформ, медицинский, выдержанный над CaCl ,| ||2 | ||ректифицированный | ||Этилацетат (этиловый эфир уксусной кислоты), |ГОСТ 22300-76||хч, выдержанный над Na CO и ректифицированный| || 2 3| ||Карбонат натрия, хч |ГОСТ 83-79 ||Сульфат натрия, безводный, хч |ГОСТ 4166-76 ||Вода бидистиллированная | |+----------------------------------------------+-----------------+1,5% карбоната натрия - 1,5 г карбоната натрия растворить в100 куб. см воды.15% этилацетата в бензоле - 15 куб. см этилацетата разбавитьбензолом до 100 куб. см.30% этилацетата в бензоле - 30 куб. см этилацетата разбавитьбензолом до 100 куб. см.Раствор Карреза I - 15,0 г гексацианоферата II калиярастворить в 100 куб. см воды.Раствор Карреза II - 30,0 г ацетата цинка растворить в 100куб. см воды.7.2. Способ подготовки пробМикотоксин патулин извлекают из проб осветленных соков инапитков пропусканием их через патрон Диапак П-3. Затем патулинэлюируют этилацетатом с патрона и после обработки растворомNa CO , высушивания, упаривания и перерастворения проводят2 3окончательную очистку на патроне Диапак С.Соки и напитки с мякотью и консистентные продукты разводятводой, осветляют растворами Карреза в соответствии с ГОСТом28038-89 <*>, фильтруют и экстрагируют патулин пропусканиемфильтрата через патрон Диапак П-3. Затем патулин элюируютэтилацетатом с патрона и после обработки раствором Na CO ,2 3высушивания, упаривания и перерастворения проводят окончательнуюочистку на патроне Диапак С.--------------------------------<*> Продукты переработки плодов и овощей. Метод определениямикотоксина патулина. ГОСТ 28038-89.Подготовленные пробы готовы к хроматографическому анализу.Для проверки правильности проведения пробоподготовки иуточнения степени извлечения патулина проводят анализ методомстандартной добавки в пробу.Время проведения пробоподготовки - 90 мин. Степень извлечения<*> - 60%. Относительное среднее квадратическое отклонение - 10%.--------------------------------<*> При снижении степени извлечения патулина см. Приложение 1.7.3. Подготовка концентрирующих патронов7.3.1. Концентрирующий патрон Диапак П-3Установить патрон Диапак П-3 вертикально в подходящееустройство для вакуумирования и открыть верхнюю крышку.Суспендировать сорбент при перемешивании стеклянной палочкой в 10куб. см бензола, дать отстояться сорбенту и пропустить при слабомвакууме, не допуская попадания воздуха, последовательно по 10 куб.см бензола и ацетона.Сохранив слой ацетона около 2 см, ввести пористый полимерныйфильтр (имеется в комплекте) и уплотнить его палочкой по верхнемуслоюсорбента.Затемпропустить оставшийся ацетон ипоследовательно по 10 куб. см экстрагента (см. п. 5.1) и смесиэкстрагент - вода (1:1), не допуская попадания воздуха на сорбентсо скоростью 2 - 3 капли в секунду.Сохранив слой последнего элюента около 2 см, отключить вакууми заглушить патрон сначала верхней крышкой, а затем (послепрекращения скапывания) и нижней заглушкой. Подготовленный такимобразом патрон может храниться в течение рабочего дня, а прислучайном пересыхании приводится в рабочее состояние прокачиванием10 куб. см смеси экстрагент - вода (1:1).Перед проведением пробоподготовки через патрон Диапак П-3пропустить 10 куб. см воды.Концентрирующий патрон Диапак П-3 многоразового применения иподлежит регенерации после проведения пробоподготовки по схеме егоподготовки, как указано выше.7.3.2. Концентрирующий патрон Диапак ССнять с патрона Диапак С заглушки и пропустить через него спомощью шприца 5 куб. см бензола и заглушить оба конца патрона.Подготовленный таким образом патрон может храниться в течениесуток при температуре не выше 25 град. C.Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения ирегенерации не подлежит.7.4. Подготовка проб к анализу7.4.1. Подготовка осветленных соков и напитковОтфильтровать пробу через плотный бумажный фильтр до получения20 куб. см фильтрата (Фильтрат П).7.4.2. Подготовка соков и напитков с мякотьюи консистентных продуктовНавеску пробы массой 10,0 г поместить в стеклянный стакан,смешать с небольшим количеством дистиллированной воды иколичественно перенести в мерную колбу вместимостью 50 куб. см. Вмерную колбу внести 6,0 куб. см раствора Карреза I и 6,0 куб. смраствора Карреза II. Содержание колбы довести дистиллированнойводой до метки, тщательно перемешать и отфильтровать в мерныйцилиндр через бумажный складчатый фильтр. Измерить объем фильтрата(Фильтрат П).7.5. Концентрирование и очистка пробы7.5.1. Концентрирование пробы на патроне Диапак П-3Весь объемФильтратаПнанестина предварительнокондиционированный патрон Диапак П-3 со скоростью 1 - 2 капли всекунду. Промыть патрон 5 куб. см бидистиллированной воды. Всесмывы отбросить.Патулин элюировать с патрона 10 куб. см этилацетата в колбуили мерную пробирку с пришлифованной пробкой, содержащую 5 куб. см1,5-процентного карбоната натрия, закрыть пробкой, интенсивноперемешать и дать отстояться. Декантировать верхний этилацетатныйслой, высушить его безводным сульфатом натрия (3 г) и перенести вколбу для упаривания. В колбу или пробирку, содержащую оставшийся1,5-процентный карбонат натрия, добавить еще 10 куб. смэтилацетата, перемешать и, после полного расслоения, высушиванияэтилацетатного слоя тем же сульфатом натрия, объединить его спервой порцией этилацетатного раствора в той же колбе дляупаривания. Операцию повторить с 5 куб. см этилацетата.Упарить этилацетатный раствор на ротационном испарителе притемпературе не выше 40 град. C до объема около 0,5 куб. см (неупаривать досуха!). Количественно перенести пробу в сердцевиднуюколбу вместимостью не более 5 куб. см или в полимерную пробиркутипа Эппендорф, промыв предыдущую отгонную колбу 0,5 куб. смэтилацетата, и присоединить к упариваемой пробе. Пробу упарить втоке азота при температуре не более 40 град. C в суховоздушнойбане до 0,5 куб. см и добавить к ней 2,5 куб. см бензола.7.5.2. Окончательная очистка пробы на патроне Диапак СБензол - этилацетатный раствор пропустить через патрон ДиапакC со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Обмыть колбу еще 0,5 - 1,0куб. см 15-процентного этилацетата в бензоле и нанести на патрон.Все смывы отбросить.Патулин элюировать с патрона 6 куб. см 30-процентногоэтилацетата а бензоле, собирая элюат в сердцевидную отгоннуюколбу. Элюат упарить досуха в токе азота при температуре не выше40 град. C в суховоздушной бане.Внимание! После упаривания пробу немедленно перерастворить в100 мкл хлороформа, охлажденного до 0 - 5 град. C (для ТСХ -анализа) или в 100 - 500 мкл охлажденной до 5 - 8 град. Cбидистиллированной воды, подкисленной до pH 4,0 уксусной кислотой(для ВЭЖХ - анализа) и быстро охладить до 0 - 5 град. C (Проба П).Хранить Пробу П в холодильнике не более 1 ч.Эквивалент массы пробы осветленных соков и напитков, взятой наанализ, М , - 20 г, соков и напитков с мякотью и консистентныхпрпродуктов определяется по формуле:VФр.ПМ = ----- x m , (7.1)пр 50 пргде:М - эквивалент массы пробы, взятой на анализ, г-прV - объем Фракции П, куб. см-Фр.Пm - масса пробы соков и напитков с мякотью или консистентныхпрпродуктов, г.Приложение 1РЕКОМЕНДУЕМАЯ МЕТОДИКАИСПЫТАНИЙ КОНЦЕНТРИРУЮЩИХ ПАТРОНОВ ДИАПАКВведениеКаждая партия концентрирующих патронов Диапак П-3, ДиапакС16М, Диапак Н, Диапак С, а также партии сорбентов Диасорб А иДиасорб АУ подвергаются выходному контролю в соответствии сТУ 4215-002-05451931-94 наихсоответствиетребованиям,предъявляемым к специализированным патронам для твердофазнойэкстракции микотоксинов. Этим метрологически обеспечивается ихпроизводство.Применение настоящих испытаний рекомендуется проводить вследующих случаях:- еслирезультатпроверкиправильности проведенияпробоподготовки методом стандартной добавки не соответствуетнормативу коэффициента извлечения-- если патроны Диапак подвергались неправильному хранению илинарушена целостность упаковки-- в случаях дополнительного сверхнормативного использованиярегенерируемых патронов (Диапак Н, Диапак П-3).Приведенные ниже методики проверки патронов Диапак позволяютвыявить ошибку по стадиям пробоподготовки. При соответствиихарактеристик патронов Диапак нормативным требованиям следуетискать ошибки в правильности подготовки растворителей иприготовлениирастворов,контроле условий упаривания иперерастворения анализируемых проб.Если среди стадий подготовки пробы присутствует подготовка напатроне Диапак С, рекомендуется начинать анализ возможной потерицелевого компонента именно с этого патрона. Это связано счувствительностьюсиликагеляк качеству используемыхрастворителей, и прежде всего с содержанием в них воды. Такаяспецифика сильной зависимости активности патрона Диапак С отусловий его хранения и качества используемых растворителей можетпотребовать оптимизации количества элюента, используемого приработе с этими патронами в конкретной лаборатории.Общая частьНастоящая Методикапредназначенадляметрологическогообеспечения применения патронов Диапак в анализе микотоксинов иустанавливает процедуру их испытаний. Критерием качества патроновДиапак является соответствие результатов испытаний нормативамкоэффициента извлечения, K , в модельных экспериментах вRсоответствии со схемами элюирования, приведенными в разделах 5 - 7настоящих Методических указаний.Коэффициент извлечения рассчитывают по формуле:C` x KdK = ------- x 100, (1)R Cгргде:K - коэффициент извлечения данных микотоксинов, %-RC` - концентрация данного микотоксина, найденная в результатеиспытания, мкг/куб. см (или S` площадь хроматографического пика,соответствующая концентрации C`)-C - концентрация того же микотоксина, используемая длягрградуировки хроматографической системы, мкг/см (или Sплощадьгрхроматографического пика, соответствующая концентрации C )-грK - коэффициент разведения образца.dЗа окончательное значение K принимаетсясреднееRарифметическое результатов двух параллельных испытаний, еслиабсолютное расхождение между ними не превышает 5%.Испытания проводятся относительным методом по схеме "введено -найдено", поэтому специальных требований к стандартным образцаммикотоксинов не предъявляется.1. Испытание патронов Диапак А-3 иДиапак П-3 по афлатоксину В1 и зеараленонуИспытание патронов Диапак А-3 проводится совместно с ДиапакП-3 из-за низких концентраций афлатоксина В1 и зеараленона, атакже их температурной лабильности, приводящей к невозможностиконцентрирования упариванием. Патрон Диапак П-3 может быть испытаннезависимо от Диапак А-3, что рекомендуется выполнять потребителючерез каждые 10 проб после соответствующей регенерации по п.5.3.3.Приготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов1,0 куб. см испытательной смеси, содержащей 0,4 мкг афлатоксина В1и 4,0 мкг зеараленона в произвольной смеси бензола и ацетонитрила.Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см перенести в сердцевиднуюколбу, и упарить растворители досуха в токе азота при температуре40 град. C. Немедленно перерастворить остаток в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению. Ориентировочные значения концентраций: 0,4 мкг/куб.см - для афлатоксина В1 и 4,0 мкг/куб. см - для зеараленона.Ввести раствор не менее двух раз в хроматографическую систему ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждогоиз микотоксинов, C (S ).гр грПодготовить патроны Диапак А-3 и Диапак П-3 в соответствии сп. п. 5.3.1 и 5.3.3.Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 25 мл экстрагента (смеси ацетонитрил - вода -84:16) и нанести на патрон Диапак А-3 в соответствии с п. 5.1.1.Полученные 20 мл элюата сконцентрировать на патроне Диапак П-3 всоответствии с п. 5.1.1. Концентратперерастворитьипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту, получивзначение C`(S`).Рассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,25.R dКоэффициент извлечения, K , должен быть не менее 90% - дляRафлатоксина В1 и 85% - для зеараленона.При испытании одного патрона Диапак П-3 вторую аликвотуобъемом 0,25 куб. см после упаривания перерастворить в 40 мл смесиэкстрагент - вода (1:1) (смеси ацетонитрил - вода 42:58) исконцентрировать в соответствии с п. 5.1.1. Рассчитать значениеK , принимая K = 1,00. Коэффициент извлечения, K , должен быть неRd Rменее 95% - для афлатоксина В1 и 95% - зеараленона.2. Испытание патронов Диапак АУ-3по дезоксиниваленолу и Т-2 токсинуПриготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов1,0 см испытательной смеси, содержащей по 20 мкг дезоксиниваленолаи Т-2 токсина в произвольной смеси бензола и ацетонитрила.Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см перенести в сердцевиднуюотгонную колбу и упарить досуха на ротационном испарителе притемпературе 40 - 50 град. C. Перерастворить остаток в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению. Ориентировочное значение концентраций: 20 мкг/куб. см- для дезоксиниваленола и Т-2 токсина. Для градуировкихроматографической системы ввести раствор не менее двух раз ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждогоиз микотоксинов, C (S ).гр грПодготовить патрон Диапак АУ-3 по п. 5.3.2.Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 20 мл экстрагента (смеси ацетонитрил - вода84:16) и нанести на патрон Диапак АУ-3, в соответствии с п. 5.5.2.После упаривания досуха остаток перерастворить и проанализироватьаналогично градуировочному эксперименту, получив значение C` (S`).Рассчитать значение K по формуле 1. Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K должен быть не менее 95% - дляRдезоксиниваленола и Т-2 токсина.3. Испытания патрона Диапак НКонцентрирующие патроны Диапак Н являются универсальнымирегенерируемыми патронами для окончательной очистки афлатоксинаВ1), зеараленона, дезоксиниваленола и Т-2 токсина, поэтомуиспытание рекомендуется выполнять через каждые 10 проб послеочередной регенерации по п. 5.3.4. Патроны Диапак Н обеспечиваюттонкую очистку указанных микотоксинов с высокими метрологическимихарактеристиками (K не менее 90%), поэтому значения K менее 90%R Rчаще всего свидетельствуют об ошибках в приготовлении элюентов илио недостаточной чистоте растворителей.3.1. Испытание по афлатоксину В1 и зеараленонуСухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести поусловиям п. 5.1.2 на подготовленный (см. п. 5.3.4) патрон ДиапакН. После элюирования и упаривания Пробы З и Пробы А немедленноперерастворить их в 0,25 куб. см растворителя, соответствующегоконечному хроматографическому определению, и проанализироватьаналогично градуировочному эксперименту по п. 1, получив значениеC (S ) и C`(S`) по каждому из микотоксинов.гр грРассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K должен быть не менее 90% - дляRафлатоксина В1 и зеараленона.3.2. Испытания по дезоксиниваленолу и Т-2 токсинуСухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 2 перерастворить в 0,5 мл хлороформа и нанести по условиям п.5.1.2 на подготовленный патрон Диапак Н. После элюирования иупаривания Пробу Д и Пробу Т перерастворить в 0,25 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению, и проанализировать аналогично градуировочномуэксперименту по п. 2, получив значения C (S ) и C`(S`) погр гркаждому из микотоксинов.Рассчитать значения K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения Kдолжен быть не менее 90% дляRдезоксиниваленола и Т-2 токсина.4. Испытания патрона Диапак СКонцентрирующие патроны Диапак С являются одноразовымипатронами для окончательной очистки афлатоксина В1 и зеараленона,а также афлатоксина М1 и патулина. Патроны Диапак С обеспечиваюттонкую очистку указанных микотоксинов с хорошими метрологическимихарактеристиками (K = 75 - 90%). Для достижения указанныхRхарактеристик необходимо установить оптимальный объем элюированиямоделированием порционного элюирования (1 - 3 порции по 3 мл)целевых фракций в ходе настоящих испытаний.Оптимальную схему элюирования, т.е. необходимое число порцийпо 3 мл, потребитель устанавливает по достижению суммарногокоэффициентаизвлечениянениже указанного норматива.Установленный объем элюирования подлежит проверке при смене партиирастворителей и их смесей, используемых для тонкой очисткимикотоксинов.4.1. Испытания по афлатоксину В1 и зеараленонуПодготовить патрон Диапак С в соответствии с п. 5.3.5.Сухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси поп. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести напатрон Диапак С в соответствии с п. 5.1.3. После элюирования ираздельного упаривания трех фракций Пробы З и трех фракций Пробы Анемедленно перерастворить их в 0,25 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 1,получив по три значения Sи одному S` по каждому изгрмикотоксинов.Рассчитать K по формуле (1) для каждой из трех фракций Проб ЗRи А K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения K должен быть неdRменее 90% - для афлатоксина В1 и 85% - для зеараленона. Определитьминимальновозможноечисло последовательных фракций,обеспечивающее суммарный K не ниже норматива. Найденное числоRфракций (от 1 до 3) и определяет оптимальный объем элюированияданных микотоксинов с патрона Диапак С данной партии сприготовленными растворителями.Если значение суммарного K меньше нормативного значения, тоRэто свидетельствует об ошибках в приготовлении элюирующих смесейи/или о недостаточной чистоте растворителей, в особенности с точкизрения содержания в них воды.4.2. Испытание по афлатоксину М1Приготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 куб. смиспытательной смеси, содержащей 0,1 мкг афлатоксина М1 впроизвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом0,25 куб. см перенести в сердцевидную колбу и упарить раствор втоке азота при температуре 40 град. C. Немедленно перерастворитьостаток в 0,25 - 1,0 куб. см растворителя, соответствующегоконечному хроматографическомуопределению.Ориентировочныезначения концентраций афлатоксина М1 0,025 - 0,1 мкг/куб. смсоответственно. Для проведения градуировочного эксперимента ввестираствор не менее двух раз в хроматографическую систему ирассчитать среднее арифметическое значение площадей пиковафлатоксина М1, C (S ).гр грВторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить, какописано выше, перерастворить в 6 мл хлороформа и нанести вусловиях п. 6.5 на подготовленный (см. п. 6.3.2) патрон Диапак С.После элюирования и раздельного упаривания трех последовательныхфракций Пробы М немедленно перерастворить их в 0,25 - 1,0 куб. смрастворителя, соответствующего конечному хроматографическомуопределению, и проанализировать аналогично градуировочномуэксперименту, получив три значения C`(S`) по афлатоксину М1.Рассчитать K по формуле (1) для каждой их трех фракций ПробыRМ K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения K для афлатоксинаdRМ1 должен быть не менее 85%. Найти оптимальный объем элюированияафлатоксина М1 с патрона Диапак С по алгоритму, приведенному в п.4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.4.3. Испытание по патулинуПриготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 куб. смиспытательной смеси, содержащей 4,0 мкг патулина в произвольнойсмеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 куб. смперенести в сердцевидную колбу и упарить растворитель в токе азотапри температуре 35 - 40 град. C. Немедленно перерастворить остатокв 0,25 куб. см растворителя, соответствующего конечномухроматографическомуопределению.Ориентировочноезначениеконцентрации патулина: 4,0 мкг/куб. см. Для проведенияградуировочного эксперимента ввести раствор не менее двух раз вхроматографическую систему и рассчитать среднее арифметическоезначение площади пика патулина, C (S ).гр грВторую аликвоту смеси объемом 0,25 куб. см упарить аналогично,перерастворить в 3 мл 15-процентного этилацетата в бензоле инанести в условиях п. 7.5.2 на подготовленный (см. п. 7.3.2)патрон Диапак С. После элюирования и раздельного упаривания трехпоследовательных фракций Пробы П немедленно перерастворить их в0,25 куб. смрастворителя,соответствующегоконечномухроматографическому определению, и проанализировать аналогичноградуировочному эксперименту по п. 4.3, получив три значенияC`(S`) по патулину.Рассчитать значение K по формуле (1) для каждой из трехRфракций Пробы П. K = 1,00. Суммарный коэффициент извлечения KdRдля патулина должен быть не менее 75%. Найти оптимальный объемэлюирования патулина с патрона Диапак С по алгоритму, приведенномув п. 4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.5. Испытание патрона Диапак П-3 по патулинуВторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.3 объемом 0,25куб. см после упаривания перерастворить в охлажденной до 5 - 8град. C воде, подкисленной уксусной кислотой до pH 4,0, исконцентрировать в условиях п. 7.5.1 на подготовленном (см. п.7.3.1) патроне Диапак П-3. После элюирования и высушивания упаритьэтилацетатный экстракт досуха в токе азота при температуре 35 - 40град. C, немедленно перерастворить в 0,25 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п.4.3, получив значения C (S ) и C`(S`).гр грРассчитать значение K по формуле (1). Значение K = 1,00.R dКоэффициент извлечения K для патулина должен быть не менее 80%.R6. Испытание патрона Диапак С16М по афлатоксину М1Вторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.2 объемом 0,25куб. см после упаривания перерастворить в 20 мл 5-процентногоацетонитрила в воде и нанести в соответствии с п. 6.4.1 наподготовленный по п. 6.3.1 патрон Диапак С16М. После элюирования ивысушивания упарить хлороформный экстракт М на ротационномиспарителе при температуре не выше 40 град. C, немедленноперерастворить его в 0,25 - 1,0 куб. см растворителя,соответствующего конечному хроматографическому определению, ипроанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п.4.2, получив значения C (S ) и C`(S`) для афлатоксина М1.гр грРассчитать K по формуле (1) K = 1,00. Коэффициент извлечения,R dK , по афлатоксину М1 должен быть не менее 95%.
законот за здравство



Москва, Сојузна Центарот за санитарна инспекција на Министерството за здравство на Русија, 1999UtverzhdayuGlavny gosudarstvennyysanitarny vrachRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO23 октомври 1999 година воведување godaData во јануари 2000 година goda4.1 -1. МЕТОДИ НА КОНТРОЛА. ХЕМИСКИ FAKTORYOPREDELENIE МАСА KONTSENTRATSIIMIKOTOKSINOV во храна суровини и PRODUKTAHPITANIYA. Подготовка на примерокот METODOMTVERDOFAZNOY EKSTRAKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMUK 4.1.787-991. Развиена од страна на Сојузниот центар на Државниот санитарен и епидемиолошки MinzdravaRossii (ВБ Skachkov, IV Bragin, кралицата NV) и ЗАО"BioKhimMak CT" (Што доведува истражувач Vasiyarov GG, ГШ starshiynauchny вработен Alexeev, виш истражувач OsokinD.M., Доктор на хемиски науки Staroverov СМ.). 2. Одобрени и го стави во сила gosudarstvennymsanitarnym главен лекар на Руската Федерација од 23 Октомври, 1999 година Г.3. Vpervye.1 воведени. Цел и опсег primeneniyaNastoyaschie Metodicheskieukazaniyaustanavlivayutsposobypodgotovki примероци на храна суровини и храна produktovmetodom цврста фаза екстракција posleduyuschegohromatograficheskogo за микотоксин анализа и безбедносни студии се dlyaprovedeniyalaboratornyh pischevoyproduktsii gossanepidsluzhby институции на Руската Федерација, како и dlyapredpriyaty и институциите вклучени во контрола на квалитетот iissledovaniya храна суровини и прехранбени производи за конзистентност со SanPiN 2.3.2.560-96 "Kkachestvu хигиенски барања и безбедност на храна суровини и pischevyhproduktov" и акредитирани во согласност со воспоставените poryadke.2. Методот на подготовка probPodgotovka примероци ги вклучува следните делови: - екстракција тест објект обезбедување на екстракт poluchenieedinogo ги содржи сите микотоксини нормализира vdannom предмет на SanPin подготовка 2.3.2.560-96-- екстракт од примерок со екстракција vklyuchayuschayapredvaritelnuyuochistku цврста фаза, kontsentrirovanieiokonchatelnuyu прочистување на концентрирање касети Diapak.3 . Барања bezopasnostiPri реагенси, растворувачи и veschestvamineobhodimo во согласност со барањата за безбедност формирана dlyaraboty токсични, корозивни и запаливи супстанции POGOST 12.1.005-88.4. Услови за подготовка probProtsessy вршење на подготовка и обработка на примероци раствор врши vnormalnyh услови на температура од 18 - 22grad. С.5. Афлатоксин Б1 (АП-B1), зеараленон (ЗоН), деоксиниваленол (DON) и на T-2 токсин (T-2) 5.1. Опрема, материјали, reaktivyTablitsa 1 + ------------------------------------ + ------ --- --------- + + + + --- --- | Опрема, материјали, реагенси | AT-B1 | ЗоН | DON | 2 || T и решенија + ---- + ---- + ---- + ---- + | ||| 1 | 2 | 1 | 2 | | ||| var. | Var. | Var. | Var. | | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | тип мешалка примероци | + || АВУ-6C ТУ 64-1-2451-78 или магнетни | || -magnetic или механичка мешалка | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | аналитичка вага со точност од | + || се мери 0.01 g +/- | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | тип Мил "циклон" КК-114 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | ротационен испарувач (TS-1м2, | + || W или 25-1173.102-84 al.) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | уред за вакуум | + || за -0.7 mmHg (Waterjet | || пумпа, вакуум пумпа нафта, | || Медицински аспиратор) | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | вакуум уред за обука | + || примероци (вакуум водот), со приемници | || прекари судењето капацитет не помал од | || 10 кубни. види | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | уред за испарување примероци | + | + | - | - | - | - || проток на азот под греење околу ||||| | || 40 степени. C (сув воздух е пожелно ||||| | || бања) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak А-3, | + | + | + | + | + | + || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak Ау-3 | - | - | - | - | + | + || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak P-3 | + | + | + | + | - | - || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak H, | + | - | + | - | + | + || ТУ 4215-002-05451931-94, ЗАО ||||| | ||"BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Концентрирајќи кертриџ Diapak C, | - | + | - | + | - | - || ТУ 4215-002-05451931-94, ||||| | компанијата || "BioKhimMak CT" ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | медицински клешти, 15 cm | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | метални шпатула или порцелан | + || лажица | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | рамно дно колба со конусна | + | + | + | + | - | - || стопери со капацитет од 50 кубни метри. см ||||| | || GOST 25.336 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | рамно дно конусна колба | + || (колба) vmestimos- конгестија | || Tew 250 или 300 cc. cm | || GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Бихнер колба со капацитет од 500 кубни метри. | + || Види | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Инка Bunsen капацитет | + || 200 кубни. види | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | Инка одвојување капацитет | + || 250 кубни. види GOST 25336 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ostrodonnye колби со затки на | + || GOST 25336 размен konu- | || сом 14/23 капацитет од 5, 10 | || 25 кубни. види | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | облик на круша колби со затки на | + | + | + | + | - | - || GOST 25.336 со заменливи konu- ||||| | || сом 14/23 капацитет од 10 и 25 кубни метри. ||||| | || види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | мерење на цилиндри, со капацитет од 25, 50, | + || 100 кубни. см 2 клетки, во согласност со GOST 1770 | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | микрошприц со капацитет од 100 кубни метри. mm | + || (или пипета дипломирал GOST | || 20292 извршување на 4 или 5, 1 classifica-. | || СА капацитет точност од 1 вв) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | филтер-хартија (густа, тесни || - || - | + | + || koporistaya полека филтрирање ||||| | | | тип тенка талог "сина ||||| | || наслови") ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | нестерилизирани медицински памук, | + || x / b | | + ------------------------------------ + ----------- ---------------- + | ацетонитрил за течна хроматографија | + || graphy, ОП-3 OFS Ту | || 6-09-14-2167-84, пречистена | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | Ацетон, висока чистота, според ТУ 6-09-3513-75 | - | + | - | - | - | - || OP-2, исправена ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | бензен, реагенс одделение, во согласност со GOST 5955-75, vyder- | + | + | + | + | - | - || zhanny над Na ПА, пречистена ||||| | || Април 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | хептан, хексан, xQ, ТУ | + | + | + | + | - | - || 6-09-3375-78 или нафтени етер ||||| | || (дел 70 - 100), реагенс одделение, ||||| | Коригира || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2-пропанол (изопропил алкохол), | - | - | - | - | + | + || xQ, ТУ 6-09-402-75, ||||| | Коригира || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | глацијална оцетна киселина, XV, во | + | + | + | + | - | - || GOST 61-75 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | хлороформ, медицински, одржан | - | - | - | - | + | + || над CaCl, пречистена ||||| | || 2 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | метилен хлорид (дихлорометан), | + | + | - | - | - | - || одржан во текот CaCl, ||||| | || 2 ||||| | Коригира || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | диетил етер, одржан во текот | - | + | - | - | - | - || NaOH, исправена ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | етил ацетат (етил ацетат + || || - || - || киселина), реагенс одделение, во согласност со GOST 22.300-76, || ||| | || одржан во текот Na CO и rektifitsi- ||||| | || 3 февруари ||||| | Роуан || ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | натриум сулфат, безводен, реагенс одделение, на | + | + | + | + | - | - || GOST 4166-76 ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | натриум хлорид, реагенс одделение, во согласност со GOST 4233-77 | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | дестилирана вода | + | + ------------------------------------ + ---------- ----------------- + | екстракција - 84% ацетонитрил во VO | + || де, 840 кубни метри. Види ацетонитрил dovo- | || dyatsya на 1 литар вода или polucha- | || etsya со дестилација со вода воден | || но - ацетонитрил смесата (1: 4) | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | 33% бензен во ацетонитрил - микс | + | + | + | + | - | - || 30 кубни. Види бензен и 60 кубни метри. Види ацетон ||||| | || tonitrila (1: 2) ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 20% ацетонитрил во бензен - 20 кубни |. + | - | - | - | - | - || cm ацетонитрил разредена бензен ||||| | || до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 2% раствор на оцетна киселина во бензен - 2 | - | - | + | - | - | - || сертификати. види разредена оцетна киселина ||||| | || бензен до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 5% раствор на оцетна киселина во бензен - 5 | - | + | - | - | - | - || сертификати. види разредена оцетна киселина ||||| | || бензен до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% етил ацетат во бензен - 10 кубни. | - | + | - | + | - | - || cm ацетат разредена со бензен да ||||| | || 100 кубни. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- ---- + + + + --- --- | 25% од хексан во воздухот - 25 кубни. види | - | + | - | - | - | - || хексан разредена со диетил етер ||||| | || до 100 кубни метри. види ||||| | | + ------------------------------------ + ---- + ---- + - --- + ---- + --- + --- + | 10% ацетон во дихлорометан - 10 кубни. | - | + | - | - | - | - || разредена ацетон cm 
Сподели на социјални мрежи: 

 
Слични
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.
» » » Медицинското право: право, документи, одговорности, правила акти.