Ctarenie во клеточни култури

Видео: Jeunesse Глобална FINITI ™ Мобилни стареење завршува тука

Cодржина

Видео: jeunesse Глобална finiti ™ Мобилни стареење завршува тука
Критериумите и причините за смртта на клеточни култури

Употребата на клеточни култури во Геронтолошки нуди единствена можност да учат на механизми на стареење и да се најде влијанија кои влијаат на овој процес.

Особено, метод на клеточната култура овозможува да се решат следните важни задачи.

1. Споредба на култури на клетки добиени од донатори од различни возрасти, можно е да се направи разлика помеѓу промени поврзани со стареењето на конститутивната предизвикана. На пример, беше откриено дека митотичното активност на хуманиот на фибробластите култури, кои се под исти услови, се намалува со зголемување на возраста на донаторските клетки (Шнајдер, Mitsui, 1976- Шнајдер, 1979).

Како резултат на тоа се забележани во senescent ткива организми се намали во Митотичниот активност (Gelfant, Смит, 1972- Камерон, Thrasher, 1976) во врска со конститутивна промена клетки себе.

Од друга страна, пак, на возраст поврзани со зголемување на индукција период тирозин црниот дроб под дејство на хидрокортизон (Аделман, 1972) треба да се смета предизвикани поради различни возрасти во култури на хепатоцити на стаорци не е забележана разлика во индукција на ензимот (Britton et al., 1976). Така, апликацијата овозможува на клеточни култури за да се утврди природата на процесот на стареење.

2. Начинот на клеточна култура обезбедува уникатна можност за истражување и внимателно проучување на конститутивната биохемиски (Vilenchik et al., 1979) и цитологија (Шнајдер, 1979), промени поврзани со стареењето. Овој метод исто така ви овозможува директно да ја потврди теоријата на стареење (Danner et al., 1978).

3. Компаративна студија на клеточни култури добиени од различни животни, го прави возможно да се идентификуваат карактеристиките на клетките од посебен интерес за биологија на стареењето. На пример, беше откриено дека животните позитивно корелира со простатата фибробластите во способноста на културата за поправка на УВ-индуцирана оштетување на ДНК (Харт, Setlow, 1974) и во негативна корелација со интензитетот на врзувањето на канцерогени за ДНК на фибробластите на овие животни (Шварц, Мур, 1977, 1979). Затоа, механизми за заштита на геномот од оштетување се за геронтолошки посебен интерес.

4. Долгорочна култура (околу една година) ин витро клетки може да се моделира многу промени што се случија во текот на стареењето. Иако прашањето за адекватноста на in vitro услови условите во телото останува отворено прашање, стареењето на клеточни култури е посветена на зголемување на бројот на експериментални, преглед (Хеј, 1967- Bershad, Гелфанд, 1970- Cristofalo, 1972- Hayfiick, 1977- Гаврилов, Гаврилова, 1978) и теоретска работа (Olovnikov, 1973- Холидеј, 1975- Хирш, 1978- Гаврилов, Yaguzhinskii, 1978).

Критериумите и причините за смртта на клеточни култури

Моментално инсталирани со ограничена животен век (RV) следниве клеточни култури на нормалните човечки фибробластен клетки (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965- Харпер, Grove, 1979), коњи, неколку видови на кенгури (Стенли et al, 1975), торбари Potorous tridactylus (Cristofalo, Стенли 1972- et al, 1975), желки (Goldstein, 1974), визон (Hayfiick, 1975), пилешко (Kaji, Мацуо, 1979) и глушец (Hayflick, 1975, 1977) -. епидермална кератиноцити (Rheinwald, зелена, 1977), мобилен глија (Brunk`et al., 1973) и човечки црн дроб (Кан, et al., 1977, 1977b) на нормална хондроцити (Мајне et al., 1976) и Rous саркомот вирус трансформира девојка фибробластите (Понтен, 1970- Leblond-Ларуш, Morais , 1976).

Сепак, и критичка анализа на податоците од литературата (Гаврилов, Гаврилова, 1978), се чини дека се уште не постои општо прифатено квантитативни критериуми за клеточна култура на смртта, и да се концепти - "смрт" и "животниот век" на култура - високо условна и субјективни.

Повеќето истражувачи нарекува култура мртов ако во рок од произволно дефиниција временски интервал (обично една до четири недели) престанува да ја зголеми својата сила на саканата вредност, и покрај поволните услови за раст (обично во собата број, 2-4 пати на бројот на првични култура) .

Според оваа дефиниција, не е потребно смртта на клетки во културата, како и секоја култура на одржливи, но не-клетките, според оваа дефиниција, се смета за мртов. Покрај тоа, културата на мртвите продолжува да расте полека, иако тие имаат низок Митотичниот активност и да содржи само 10-20% од клетки способни за репликациски синтезата на ДНК (Cristofalo, Sharf, 1973- Мило, Харт, 1976).

Такви култури понекогаш спонтано враќање на нормален раст, а потоа направи неколку удвојувања населението пред почетокот на следната "смртта" (Холидеј, Tarrant, 1972). Масовно изумирање на клетките на крајот на културата на животот, кое спроведен големо значење за почетокот на градежните работи (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965), беше артефакт на reseeding операција.

На фактот дека со култивирање на клетките subcultured редовно, t. E. Закачено за обработка на подлогата клеточен слој 0,1% раствор на трипсин (trypsinization) и сепарација ќелија одвои еден формирање да се од страна на хидродинамичен ефекти (суспендирање).

Во првиот умре големи клетки (Мило, 1973), во која повеќето од старите и мртвите култури (Бауман et al., 1975- Mitsui, Шнајдер, 1976). Покрај тоа, во овие култури се зголеми бројот на мобилни контакти, што не може да биде уништен за време subculturing, без оштетување на клетките себе (Мило, 1973).

Затоа, во услови на бавен раст на културата на константна уништување на клетките во процесот на пресадување впечаток на целосна лиза. Во оние случаи каде беа исклучени влијание на reseeding операции, не е забележано зголемување на стапката на клеточна смрт на возраст од културата.

Како резултат на тоа, ограничен панкреасот клеточни култури исклучиво предизвика намалување на Митотичниот активност, и без губење на самите клетки. Покрај тоа, постои причина да се претпостави дека тоа е намалување на Митотичниот активност е причината за повеќето од морфолошки и биохемиски промени забележани во клетките на старите и мртвите растенија.

На пример, беше откриено дека опишани на крајот на животот култура "дегенеративни" клетки кои спроведен големо значење во почетокот на студии (Hayfiick, Moorhead, 1961- Hayfiick, 1965), не предизвика, како последица на смртта на културата, т. Е. Намалување Митотичниот активност. Констатирано е дека многу од таканаречените "дегенеративни промени" може да се добијат во еден млад култура, потиснати за еден долг период на клеточната делба.

Сите овие "дегенеративни промени" исчезне по неколку удвојувања населението, ако повторно да се создадат услови за култура раст (Brunk et al., 1973). Зголемување на големината на клетките во стареење култури, исто така, очигледно предизвикана од забавување и запирање на клеточната делба. Всушност, не е забележано зголемување на големината само во клетките кои не се синтетизираат ДНК (Бауман et al., 1975).

Горенаведените факти укажуваат дека проблемот на стареењето на клеточна култура во суштина се сведува на проучување на причините, механизми и последиците од забележано намалување на Митотичниот активност.

Овој процес не мора да предизвика штета и стареењето на клетките и може да биде последица на нивната диференцијација (Гаврилов, Гаврилова, 1978- Гаврилов, Yaguzhinskii, 1978), кој е често придружена со намалување на Митотичниот активност (на Труман, 1976). Затоа, концептот на "смртта", "смрт", "стареење" и "животниот век" на клеточни култури се многу условно, како и на концептот на "младите" и "стара" култура.

Нивната употреба поставува на истражувачите да се учат на механизмите на болести и повреди, иако самото постоење на овие повреди и заболувања во клеточна култура не е докажано, и не е утврдена нивната улога во намалувањето на Митотичниот активност.

Затоа, препорачливо е да се користат и други услови кои ќе се фокусираат вниманието на истражувачите е на она што навистина се случува, тоа е. Д. На намалување на Митотичниот активност. веќе се воведени такви услови.

Наместо тоа, концептот на "живот", "стареење", "смртта" и "смртта", се предлага да се користат термините "репликациски животен век" ќелија култура "репликациски стареење", "смрт репликациски" и "репликациски смртта" на клеточна култура.

Концептот на "младите" и "стара" култура е, исто така, сега се користи со придавката "репликациски". Јанг (поделба) клетки наречени репликациски, и стари и мртви (без поделба) - postreplicative.

За краткост, старите концепти понекогаш се става во наводници, со што се потенцира нивната конвенција (Norwood et al., 1974- Гаврилов, Гаврилова, 1978). Значајно е тоа што дури и сега на биолошката возраст на културата е утврдена од страна на процентот на клетки кои не се способни да репликациски синтезата на ДНК (Cristofalo, Sharf, 1973- Бауман et al., 1975).

Во моментов, товарот основана на следниве основни манифестација на "стареење" на клеточни култури.

1. Намален процентот на клетки способни за споделување (Мерц Рос, 1969- Cristofalo, Sharf, 1973).

2. Зголемување на периодот на митотичното циклус. Radioautographic откриени од страна на зголемување на минимален период на создавање на клетки во човечките фибробластите од 16 до 21-22 часа (Macieira-Коелјо et al., 1966). Филмски студија покажа зголемување на просечното време меѓу означувањата со "стареењето" човечки фибробластот култури 16,8-32 часа (Absher et al., 1974).

3. "стареење" клеточни култури подобрена инхибиторен ефект на густината на населението на стапката на раст (Macieira-Коелјо et al., 1966- Absher et al., 1974- Шнајдер, Mitsui, 1976), така што густината на сатурација на репликација старите култури е околу 2 пати помал од "младите" култури (Шнајдер, Mitsui, 1976).

Сподели на социјални мрежи:

Слични