Ендокринологија протеолитички ензими ефект врз метаболички активност на мозокот клетки и неутрофилна леукоцити албино стаорци

Познато е дека протеолитички ензими (трипсин, химотрипсин, и други) во некои случаи имаат нагласена protivovospalitelnoedeystvie. Во овој поглед, релативно протеаза ензими shirokoispolzuyutsya за лекување на разни воспалителни болести групи: бронхо-белодробни, гинеколошки, стоматолошка, opuholevyhprotsessov (2,7,14), како и во превенција на воспаление на хирургија (6). механизми меѓувреме воспалителни процеси профилактички и терапевтски deystviyaproteoliticheskih fermentv ostayutsyanedostatochno изучува. Повеќето целосно осветлена и улогата на литературата argumentirovanav некроза и фибринолитичка (тромболитичка) ефект на протеаза во нивниот анти-инфламаторен ефект (5,6). Сепак, литературата е малку докази за директен ефект на протеаза на metabolicheskuyuaktivnost клетки.

Работата беше насочена експериментални issledovanievliyaniya трипсин и каликреин на aerobnogookisleniya ензимската активност на нервните клетки и макрофаги игра водечка Rolv спречување на воспаление (gematoentsefalicheskiybarer).

Материјали и методи.

На експерименти беа извршени на 61 бели стаорци машката популација Vistarmassoy 200-250 g Постигната 10 серија на експерименти: 6 серии - контрола кој студирал дехидрогеназа активност во системот на неутрофили leykotsitahi "неврон-neuroglia" mozgaintaktnyh кортекс на животните од страна интраперитонеална инјекција од 0,85% раствор на натриум rastvorahloristogo неактивна трипсин и каликреин (39krys) - Серија 4 - експериментални во кои degidrogenazneyrotsitov активност изучувал од страна на интраперитонеална инјекција на активни трипсин и каликреин, како и на активноста на дехидрогенази и содржината на гликоген во neytrofilnyhleykotsitah стаорци со интраперитонеална инјекција од aktivnyhfermentov тестот (24 животни). лекови тестот биле администрирани од rascheta50 микрограми на 100 грама тежина на животните. Студија на метаболички nervnyhkletok кортекс неутрофилни леукоцити osuschestvlyalispustya стаорци 6 часа по интраперитонеална администрација на експерименти тестот preparatov.Rezultaty се прикажани во табелите N1 и N2.

Кога хистохемиските студија објект izucheniyasluzhil делот стаорец мозокот, се направени во левата peredneytsentralnoy гирус. За хистохемиските анализа беа подготвени kriostatnyesrezy 15 микрони дебел на -20^oC во mikrotome- kriostateMK-25 од страна на вообичаените метод [9]. mozgakrys мозочната кора клетки лактат дехидрогеназа активност е откриен, постапката glitserofosfatdegidrogenazypo Хес, Scarpelli, Pierce [9] и suktsinatdegidrogenazypo постапка Nahlasa [8]. Активноста на дехидрогенази суди pokontsentratsii formazan гранули во делови од објекти. Kontrolspetsifichnosti degidrogenazprovodili хистохемиските откривање на активност на cryostat делови на мозочното ткиво inkubirovaliv кои работат решенија во отсуство на специфични substratovokisleniya во него. Сметководство хистохемиските реакција со користење на дехидрогеназа osuschestvlyalis cytophotometry на бранова должина од 512 nm, zonda0,1 см дијаметар, леќа 40 [1]. Проценка на чисто хемиски реакции otsenivaliv апсорпцијата единици. Во одредувањето на активноста на неутрофилни гранулоцити degidrogenazv крв бели стаорци истражени aktivnostSDG [15], LDH и за начинот TPD Хес et al. [8] модификација предложен Борисова р et al. [3,4]. Цитохемиски vyyavlenieglikogena во неутрофилна леукоцити беше изведена од страна на метод на Hotchkiss-Shabadash [11,13]. Конечна проценка цитохемиски реакции osuschestvlyalipo принцип Kaplow Л [14]. Полиморфонуклеарните леукоцити во zavisimostiot степен на ензимската активност е класифициран:
1 степен - во цитоплазмата на индивидуални пелети содржани formazana.Aktivnost ензим занемарливи (слика 1а).
2 степен - formazan гранули зафаќаат помалку од половина tsitoplazmykletok. Оваа група вклучува клетки кои содржат мал (прашина) вклучува или многу бледа боја дифузна маса (1б).
3 степен - изрази подмножества леукоцити со производи на хемиската реакција, кои зафаќаат повеќе од половина од цитоплазмата на неутрофили (Fig.1c).
4 степен - изрази клетки со инклузии реакција производи заземаат целиот цитоплазмата на леукоцити на неутрофили. Aktivnostfermenta висока (ris.1g). Резултатите од истражувањето статистика obrabatyvalimetodami варијација.

Резултати и дискусија.

Интраперитонеална инјекција од стаорци предизвика зголемување на трипсин ilikallikreina во neurocytes и клетки neyrogliibolshih церебрална хемисфера ензимската активност aerobnogookisleniya - LDH 27,2% (p < 0,001), на 18,2% (р < 0,002)соответственно. Активность ЛДГ в изучаемых клетках больших полушарийголовного мозга под действием трипсина и калликреина снизиласьна 27,8% (p < 0,025) и на 16,3 (р < 0,001) соответственно.Активность ГФД в нейроцитах и клетках нейроглии больших полушарийголовного мозга снизилась на 26,0% (р < 0,01) только под действиемтрипсина. Введение калликреина также вызвало уменьшение данногоцитохимического показателя на 5,3% (р < 0,05).

Резултатите од студијата се претставени во Табела obobschenyi. N1.
Ефект на трипсин и каликреин на дехидрогеназа активност, neuroglia sistemeneyrotsit мозочната кора на стаорци in vivo (М +/- m).

Забелешка: броителот - Активност degidrogenazv условен вообичаените единици во именителот - промената на индексот во однос на контрола protsentahpo. За серија на експерименти N3,4 - контрола yavlyaetsyaseriya N2. Серија серија N5- N3. За серија N6 - N4 серија. (*) - p < 0,05- (**) - р < 0,025- (***) - р < 0,01- (****)- р < 0,002- (*****) - р < 0,01.

Податоци Споредба на хистохемиските issledovaniyameta параболична активност на мозочните клетки и крвни belyhkrys проучувале дејството на протеази идентификувани истите индикатори napravlennostizuchaemyh. Парентерална администрација tripsinai каликреин животни во доза од 50 mg на 100 g од телесната тежина предизвикани suschestvennyysdvig систем метаболизмот и неврон-neuroglia и кората golovnogomozga и неутрофили кон зголемување на аеробни оксидација vosstanovitelnyhprotsessov, како што е јасно потврдено од страна на зголемување aktivnostiSDG, клучен ензим во оксидативна фосфорилација. Uchityvayapryamoe kininogenaznoe акција крв трипсин и каликреин [12], можеме да претпоставиме дека имаме идентификувани цитохемиски izmeneniyav клетки на кортексот на церебрална хемисфера на obuslovlenybiologicheskim акција стаорец на кинини, која, најверојатно pronikayutcherez крвно-мозочната бариера и да се стимулира во процесите на нервните tkaniaerobnye редокс.

Намалена активност на LDH, клучен ензим aerobnogookislitelnogo ензим во клетките на мозокот и крвта на belyhkrys од дејството на трипсин, укажува дека тоа fermentpri парентерална администрација инхибира гликолизата во клетките со специфичност razlichnoyfunktsionalnoy.

Познато е дека во споредба со повеќето drugihkletok тело во сите леукоцити гликолитични prevraschenieuglevodov преовладува во текот на оксидативна фосфорилација. Udelnyyves гликолизата е повеќе од 60% во вкупната energeticheskihprotsessov [10].

Табела 2.
Промени дехидрогеназа и содржина на гликоген во neytrofilnyhleykotsitah бели стаорци под дејство на трипсин и каликреин (М +/- m) - (во единиците на активност Kaplow)

Забелешка: во секоја серија issledovaniyi користи во контролата на 6 животни. Значењето на разлики: p < 0,001.

1. Парентерална администрација на ниски дози на трипсин horoshoizuchennymi заедно со терапевтски својства, го инхибира анаеробни energeticheskiyobmen неутрофили инхибираат на леукоцити процес на миграција ochagvospaleniya и на тој начин го спречува ширењето vospalitelnogoprotsessa.
2. Ефект на мали дози на трипсин зголемува antitripticheskuyu aktivnostgomogenata на церебрална хемисфера на стаорец и има vyrazhennyylechebny анти-инфламаторен ефект.
3. Мали дози каликреин, како и ниски дози на трипсин snizhayutaktivnost LDH и TPD во неутрофилите леукоцити и мозокот хомогенат stimuliruyutantitripsinoliticheskuyu mozgakrys активност која им овозможува на каликреин во мали дози, како и трипсин, се користи како антиинфламаторно средство.

референци

1. Agroskin LS Papayan GV Cytophotometry: опрема и metodyanaliza на апсорпција на светлина клетки. - Ленинград. Науката, 1979.- 259 стр.
2. Baumhakl U. С. Fodemar, Kreychova Х. ензим ostryhi хронични воспалителни процеси во книгата: Системски ензимска терапија: истражување и клиничката пракса. Изменето K.Nouza, ZA. Masinovsky, Р. Nouza. - Минхен. - Прага. - 1994 година - С. 27-30.
3. Борисова м-р, Овчаренко НУ, бањи КАКО Некои supravitalnyesposoby цитохемиски определување на активноста на сукцинат дехидрогеназа laktatdegidrogenazyi крвни клетки // лаб. бизнис. - 1975.- N 12 - С. 723-725.
4. Борисова м-р, Овчаренко НУ Shpak SI, et al. Supravitalnyesposoby цитохемиски утврдување на активноста на алфа-glitserofosfatdegidrogenazyi глукоза-6-фосфат дехидрогеназа во леукоцити perifericheskoykrovi // Lab. бизнис. - 1983 година - N 9. - PP 8-10.
5. VF Veselov, Вирџинија Protsenko Ефект на протеолитички ензими uux инхибитори на навлегувањето на кислород мозочно ткиво на стаорци и eeantitripticheskuyu активност // UKR. Biochem. Zh. - 1981 година -N 4. - pp 106-108.
6. Волкот, М. К. Третман Ransberg ензими. - Москва: Мир, 1976.- 233 стр.
7. Dittmar DF Аднекситис во книгата: Системски ензимска терапија:-студии niyai клиничка пракса. Изменето од К. Nouza, ZA. Masinovsky, P. Nouza. - Минхен. - Прага. - 1994 година - С. 35-36.
8. Е. Пирс Histochemistry теоретски и применети. Москва: Inostr.liter, 1962.- 962 стр ..
9. Fedorov NA Нормална хематопоеза и нивното регулирање. - Москва: медицина, 1976. - 543 стр.
10. Shabadash AL Цитолошки и цитохемиски механизми predstavleniyao бариера во клетките. Зборник на трудови на состанокот во книгата: histo-gematicheskiebarery. - Москва: Наука, 1961 - П. 381-394.
11. Hamberg U. Влијанија врз системот на кинин со протеолиза inplasma // proc. Рој. Сол. - Лондон, 1969 година - В. 173. - P. 393-406 N 1032.-.
12. Hotchkiss R.D. A microchemical реакција resalting во staimingof полисахарид структури во фиксна yissue препарати // Арх. Biochem. - 1948 година - V.16. - P. 131-141.
13. Kaplow L. A хистохемиските постапка за локализирање на една evacuatingleucocyte alcaline phasphatase активност во тестови на крвта срцевина // крв. - 1955 година - V.10. - P. 1023-1029.
14. Klashka Ф. Усна enzimes - нов пристап кон cfncer tritment // форум. - Мед. - Verl. - ГЕС. - 1996 година -V.2.- R. 102.
15. Quglino D., Hayhol F. Ацетон фиксација за cytochemicaldemonstration на dehidrogenase во крвта и коскената срцевина ctlls // Nature.- 1960 година -V.1.- P. 85-86.
16. Соколова А. Behandlung des multiplen myeloms mit enzimen // Wzarba Ј, Клајн M.-W., Miehlke et al. (Ред.). Sistemischeenzymtherapie. Aktueller стојат и Fortschritte. - MMW MedizinVerlag. - Минхен. - Германија. - 1996 година.