Не-изотопски методи на имуно на хормони

Ова беше првиот метод за прецизно квантитативно определување на хормони, е широко се користи и одигра огромна улога во лабораториска дијагноза на ендокрините пореметувања. Тоа се базира на современи принципи формирана РИА имуно хормони. Сепак, во текот на изминатите дваесет години, РИА е речиси целосно се елиминира од клиничката пракса на не-изотопски методи на имуно - ELISA и анализа immunohemilyuminestsentnym. На основа на овие методи, како и во РИА базирани, на интеракција на антигени и антитела, но се користат како етикетата не-радиоактивни изотопи, и ензими кои го катализираат реакција за да се формира боја производ, или луминисцентните супстанција. Во првиот случај, во завршна фаза на анализа на оптичката густина на реакционата смеса во вториот - бројот на фотони емитирани од страна на луминисцентните супстанција.

Видео: Регионална лабораторија и дијагностички центар имунохемиски методи на истражување IHMI

поврзан имуносорбент

За квантитативно определување на хормони кои најчесто се користат цврста фаза ELISA со две антитела. Се спроведува во мулти-и пластични чинии. На дното на бунари sorbed моноклонални антитела специфични за одредена антигенска детерминанта хормон. Бунарите се серуми примероци со непозната концентрација на хормони или стандард примероци со познати концентрации на хормонот. Плочата беше инкубираат за 30-120 мин-тоа време, хормон молекули успее да се поврзете со антитела adsorbed на пластика. По инкубацијата, бунари се мијат со тампон за да се отстранат неврзаните хормони и други серумски компоненти. Тогаш бунари што поликлонални антитела кон хормонот во спрега со пероксидаза (т.н. конјугирана), а плочата беше инкубираат 15-30 мин. Каде што молекулата на коњугатот се врзува за молекулите на хормон. Бунарите повторно беа измиени да се отстранат неврзаните спрегнат и се додава на своите раствор кој содржи безбоен пероксидаза подлогата. Пероксидаза претвора подлога во боја на производот. Интензитетот на растворите за боење во бунари (се мери во фотометар) е директно пропорционален на количината на коњугатот во бунарот, а тоа е - концентрацијата на хормоните. концентрација на хормони во серумски примероци се пресметува од калибрациона крива подготвени од мерења на концентрациите на хормони на стандардни примероци.

Треба да се нагласи дека овој метод ELISA, за разлика од погоре опишаните методи РИА, е неконкурентни. На фактот дека во смесата од реакцијата во отсуство на означени антигенот и ниво на врзувањето на поликлонално антитела (конјугирана) со антигенот adsorbed на моноклонални антитела зависи од концентрацијата на антиген во примерокот. Неконкурентни методи се користат и кога immunohemilyuminestsentnom анализа.

Immunohemilyuminestsentny анализа

Постојат многу опции immunohemilyuminestsentnogo анализа. Ние ќе се опише примерен олицетворение, кој се користи да се измери нивото на гонадотропини во модерната autoanalyzer. Во овој олицетворение, хормон се користи за врзување на парамагнетски микрочестички обложени со моноклонално антитело високо специфични за одреден хормон. Микрочестичките се суспендирани во пуфер раствор и се додава на суспензија на серумски примероци или стандард примероци. По кратка инкубација (10- 20 мин) микрочестички со врзани на хормонот за да се наталожи во магнетно поле и мијат неколку пати. Потоа микрочестичките се resuspended во тампон и се додава на суспензија на поликлонални антитела на хормон во спрега со алкална фосфатаза. По миење на неврзан коњугатот е внесен во суспензија на микрочестички dioksetina фосфат. Под дејство на алкална фосфатаза фосфат dioksetina формирана dioksetin емитуваат Луминисценција зраци. Интензитетот на Луминисценција, која се мери од страна на photomultiplier, е директно пропорционална на концентрацијата на хормонот во примерокот.

Видео: Лабораториски студии

Методи за откривање на автоантитела

Репродуктивни нарушувања може да биде директно или индиректно предизвикани од автоимуна патологија. На пример, машки неплодност може да бидат предизвикани од страна на автоимуна реакција против спермата, и во патогенезата на неплодноста кај жените може да ја играат улогата на автоимуна болест на тироидната жлезда или адреналните жлезди. Маркери на автоимуни патологии се автоантитела. За откривање на серумски автоантитела (на пример, антифосфолипидни антитела, антитела на yodidperoksidaze или 21-хидроксилаза) се користи метод immunohemilyuminestsentny анализа и индиректна имунофлуоресценција ELISA. Во вториот случај, како што антигенски супстрат користење cryostat делови ткиво, против која автоимуна реакција е насочено. За откривање на сперматозоидите антитела во семето и метод на грлото на матката слуз microagglutination се користи со латекс честички обложени со антитела на IgA или IgG.

други методи

За некои хормони, како катехоламини и серотонин, не е лесно да се воспостави сигурен методи на имуно. Фактот дека овие материјали имаат многу ниска молекуларна тежина и против нив е тешко да се добие високо специфични антитела основно, моноклонални дури. Слични потешкотии во развојот на методи за имунохемиски анализа на стероидни хормони и нивни деривати (се должи на голема веројатност на вкрстена реакција со различни основни антитела стероиди има голема сличност антигенски). Затоа, за прецизно квантитативна анализа на такви агенти во последниве години се почесто се применува високи перформанси течна хроматографија проследено со масена спектрометрија.

Често, ендокрини заболувања, вклучувајќи ги и репродуктивни нарушувања, не се предизвикани од патолошки промени во нивото на гонадотропин и полови хормони и нивните рецептори мутации. За да се процени рецептор функција претходно се користи биолошки тестови за ин витро: пациентот се биопсија на ткиво кое е цел на хормонот биопсии биле сместени во културата медиум е додадена на средни и оценува хормон ткиво одговор на овој хормон. Денес на рецепторот на мутации откриени од страна на утврдување на ДНК секвенцата од нуклеотиди во соодветните гени. ДНК за такви анализи обично се подготвени од лимфоцити пациентот.