Методи за лабораториска дијагностика. имунолошки методи

Видео: CMD - Центарот за молекуларна дијагностика

Имунолошки методи имаат важни дијагностички и прогностичка вредност во многу ревматски заболувања.

Проучување неспецифична имунитет вклучува испитување на бројот на леукоцити и моноцитите во крвниот серум, компоненти на комплементот, проценка подвижност, фагоцитни и микробицидно активност на мононуклеарниот фагоцитен, производство на проинфламаторните цитокини (IL-IP, IL-6, TNF-алфа, и др.).

нивоа на зголемување на комплементот е забележан во акутна инфламација, инфективни процеси и намалување - под immunocomplex болести. Така, намалување на концентрацијата на C2-CS, и компоненти на комплементот во реакцијата на таложење со антисеруми типичен за SLE, RA, анкилозен спондилитис, васкулитис, улцеративен колитис. Ова се должи на активирањето на системот на комплементот се должи на формирањето на имуни комплекси. Утврдување дијагностички значајни компоненти дополнување во синовијалната течност (содржината намалува RA) во цереброспиналната течност (содржина се намалува со лупус tsereb-rovaskulite) во биопсии на кожата и бубрезите.

Состојба на клеточниот имунитет се оценува од страна на квантитативните индикатори (апсолутен и процент на Т-лимфоцитите, активни Т-лимфоцитите, Т-помошник тип I и цитотоксични Т-лимфоцити) и функционални тестови.

Најчесто се користи:
&diams- реакција инхибиција на леукоцитите миграција (RTML) во присуство на антигени и митогени: RTML со phytohemagglutinin (PHA), concanavalin A (CON A), алергени хемолитична Streptococcus, Staphylococcus. Реакцијата е врз основа на имот на лимфоцити со чувствителност на специфични антигени за да се формира стабилизирање лимфокини миграција инхибиторен leykotsitov- повисока функционална активност на лимфоцити, помали фигури RTML;
&diams- лимфоцитна реакциона Експлозијата трансформација (BTR), која се оценува со користење на функционална активност на Т-лимфоцити. Во одговор на митогени (PHA), Con А и antilymphocytic серум et al. Лимфоцитна трансформација се случува во лимфобласти (поголемите експлозијата клетки е формирана, толку поголема активност на Т-лимфоцити).
Субпопулации на Т-лимфоцити утврдени со моноклонални антитела.

Да се оцени функционална држава на хуморалниот имунитет користење квантитативно определување на имуноглобулини во крвната плазма. Имуноглобулин (Ig) - се протеини кои имаат функција на антитела и поделени во пет главни класи: IgG, IgA, IgM, ИгД, IgE.

IgG присутни во серум во најголема концентрација (6,39-13,49 g / l), тоа е околу 80% од активноста на антитело. Разграничување 4 подкласа IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) и IgG4 (1-3%).

IgA е главен секреторен имуноглобулин се наоѓа во плунката, солзи, бронхијална и цревните секрети и мајчиното млеко. тајни IgA димерот е една форма која содржи J-синџир, уште еден пептид, наречен секреторни компонента. На концентрација на IgA во стандардот е 0,7-3,12 g / l.

IgM се состои од 5 мономерни субединици поврзани со дисулфидни мостови и J-синџир, формирање на pentamer. серумска концентрација IgM нормално изнесува 0,86-3,52 g / l.

IgD е во трагови во серумот, но е основен тип на имуноглобулин присутни на мембраната на B-лимфоцити. ИгЕ игра важна улога во реакциите на непосредна хиперсензитивност.

За да се одреди концентрацијата на главни класи на имуноглобулини (IgG, IgM, IgA) користење на методот на радијална имунодифузија или nephelometric техника, IgE - високо чувствителни радиоимуноесеј или ензимски имуно техники.

Одредување на концентрацијата на имуноглобулини се користи за дијагноза на примарна или секундарна имунодефициенција (во овие случаи, намалување на концентрацијата на главни класи на имуноглобулини) и моноклонални immunoglobulinopaty (во комбинација со имуноелектрофореза серум и урина).

Најчестиот вид на имунодефициенција е ИгА-immunodefi-op, развојот на кои понекогаш се забележува кај ревматски заболувања, а исто така може да се случи во услови на одредени лекови (Д-пенициламин, сулфасалазин, каптоприл и др.). Зголемување на концентрациите на ИгА често се забележува кај серонегативни спондилоартропатии, хеморагичен васкулитис, Сјогренов синдром, псоријатичен артропатија.

Често во воспалителни ревматски заболувања се забележува развој на поликлонални Хипер.
Ревматоидниот фактор (RF) се автоантитела на Fc-фрагмент од IgG, иако тие можат да бидат поврзани со IgM и IgA.

Можеби блокирање на ревматоиден фактор автологен IgG, што доведува до зголемување во проценти скриени, RF во комплекс (со продолжено времетраење на ревматоиден артритис со vistseritami).

Да се идентификуваат RF класа М применува:

&diams- аглутинација реакција инертен латекс латекс честички обложени со човечки Ig. Највисоката давање серум разредување аглутинација титарот смета реакција. Титарот 1:20 или повисоко се смета како позитивен;
&diams- реакција Vaaler Rosa со овчо црвени крвни клетки обложени со зајакот анти-овци црвени крвни зрнца.

Највисоката серум разредување давање аглутинација дијагностички значајна, ако не и помалку од 01:32.
Lupus (LE) -cells. Во присуство на LE-клетки се должи на присуството во серумот на IgG класа антитела на ДНК-хистон комплекс, кој реагира со јадра се ослободени од различни клетки како резултат на уништување на овие клетки. LE-клетки се наоѓаат во 60-70% од пациентите со СЛЕ. Тие се зрели неутрофили, фагоцитираат нуклеарна суштината на уништените клетки. Во цитоплазмата на неутрофили пронајдени големи хомогени вклучување (hematoxylin крвни зрнца).

Во случај на непотполна фагоцитоза од страна на неутрофилите акумулирано околу теле hematoxylin облик сокет (розета формирање феномен). Резултат открие барем LE-5 клетки на 1000 белите крвни клетки се смета за позитивен. Единица износ LE-клетки се наоѓаат во 10% од пациентите RA, хроничен активен хепатитис, дрога алергии, periarteritis нодоза, системска склеродерма, дерматомиозитис, мешани болести на сврзното ткиво.

Антинуклеарни антитела (АХА) најчесто се дефинира во ревматски заболувања и се јавуваат кај повеќе од 90% од пациентите SZST. Тие се едно семејство на автоантитела во интеракција со рибонуклеинска киселини и протеини, јадро, цитоплазматски антигени. АХА утврдени со индиректна имунофлуоресценција, двојно имунодифузија и kontrelektroforeza, ELISA и имунобио.

При користење на индиректен метод имунофлуоресценција во пракса, има шест видови на бои или Луминисценција, јадра кои се важни за дијагноза на системски заболувања на сврзното ткиво:
&diams- хомогена боење се должи на присуството на антитела на двојно-верижна ДНК и histones, повеќето карактеристика на СЛЕ и лупус дозирна;
&diams- периферни боење предизвикани од циркулира антитела на нуклеарна мембрана (конкретно за SLE);
&diams- гранули боење најчесто се случува, што укажува на присуство на разни Аха, па има најниска специфичност (наведено во СЛЕ, РА со висцерални манифестации, мешани болести на сврзното ткиво);
&diams- нуклеарните (нуклеарните) Луминисценција се должи на компонентите на антитело нуклеолуси се јавува во SSC, болест Shegrena- ANF повремено даде во ендокрини заболувања (poliendokrinopatiya, тип I дијабетес мелитус, тироидитис, тиреотоксикоза), заболувања на кожата (псоријаза, пемфигус), како и позадината на бременост по трансплантација на органи и ткива (во развојот на реакцијата "калем против домаќин"), кај пациенти на хемодијализа;
&diams- центромерна Луминисценција е забележано во појавата на антитела на centromeres на хромозоми (карактеристична хроницитет MICS);
&diams- цитоплазматски светло укажува на присуство на антитела против тРНК синтетаза, особено Jo-1 (заеднички во дерматолошки и полимиозитис).

Методи на радиоактивен и имунолошкиот обврзувачки, радијална имунодифузија, имунопреципитација откри АХА на специфични нуклеарни антигени.

Антитела на деоксирибонуклеинска киселина (ДНК). Антитела на мајчин јазик (двојно верижен) ДНК, особено оние кои се откриени од страна на тестовите радиоимуноесеј (метод Pharr), релативно специфични за СЛЕ. Нивната дефиниција е од суштинско значење за оценување на активноста на болеста, предвидувањето на развојот на егзацербации и ефикасноста на терапијата. Антитела на денатуриран (едно-) ДНК помалку специфични за SLE и често откриени во други ревматски заболувања.

Антитела на histones. Хистони - јадро компонента, која се состои од три субединици: две димери H2A-H2B дека нападната на NS-H4 тетрамер и се поврзани со третиот субединица која се состои од два се врти на молекулот на DNA.

Антитела на histones H2A-H2B се најде во речиси сите пациенти со синдром на дрога лупус (предизвикана novokainamidom), кај пациенти кои примаат прокаинамид, но немаат симптоми на лупус, како и во 20% од пациентите со СЛЕ.

Антитела на рибонуклеопротеински (RNP). Антителата на рибонуклеопротеински содржи анти-Sm, анти-snRNP (U1RNP), анти-Ro / СС-А, анти-La / СС-B, кои се наоѓаат во СЛЕ вкупно повеќе од антитела да се зголеми двојно-верижна ДНК. концентрацијата на овие антитела во крвта е исклучително висока. Резултати во мешани болести на сврзното ткиво, барем - кај пациенти со СЛЕ, кој е водечки на клиничка манифестација на кожните лезии, субакутен SSD и други автоимуни ревматски заболувања.

Антитела на Sm (Smith) -antigenu. Антитела на СМ-антигенот се најде само во СЛЕ. Користење на методот имунофлуоресценција се утврдени во 30% од случаите, а 20% - во согласност со методот на hemagglutination. Антитела на SM-антиген не е откриен во други ревматски заболувања, така што тие се смета како маркери на СЛЕ антитела и нивна детекција е еден од дијагностички критериуми за болеста. Во присуство на SM-антитела е забележано за малигна болест, централниот нервен систем, лупус психоза и во однос на зачувување на бубрежната функција. Сепак, нивото на антитела на СМ-антиген не е во корелација со активноста и клинички подтипови на СЛЕ.

Антитела на Ro (Роберт) / СС-А се насочени против нуклеарна рибонуклеопротеини, кои се поврзани со ил-Y5 цитоплазматски RNA, транскрибирани од страна на РНК полимераза III. Во зависност од чувствителноста на користат за изучување на антитела Ro / СС-А методи се наоѓаат во 60-78% од пациентите со Сјогренов синдром, во 96% од пациентите со болест Сјогренов и 35-57% од пациентите со СЛЕ.

Во СЛЕ податоци за производството на антитела поврзани со одредена група на лабораториски и клинички манифестации на нарушувања: фотосензитивност, Сјогренов синдром, оштетување на белите дробови, лимфопенија и тромбоцитопенија хиперпродукција RF. Зголемување на концентрацијата на антитела на Ro / СС-А во комбинација со хипер IgM RF тоа е често забележано во ANF-негативни подтип болест (во 2-5% од пациентите со SLE) - т.н. субакутен кожен лупус.

Антитела на La (Лејн) / SS-B насочени против протеин којшто е поврзан со записници од РНК полимераза III. Антитела на La / СС-B во поголемиот дел од случаите се јавуваат во врска со антитела на Ro / СС-A, додека вториот може да се случи во изолација. Антитела на Ла / SS-B се наоѓаат во болест и Сјогренов синдром, во комбинација со РА и СЛЕ (но не и системска склеродерма) и примарна билијарна цироза. Во СЛЕ антитела на СС-Б / La-антиген е поверојатно да се случи во почетокот на болеста, која се развива во старост, и е поврзан со пониска инциденца на развој нефритис.

SCL-70 антитела обично се откриени во дифузна форма на системска склероза. Во ова присуство болест SCL-70 антитела во комбинација со гени превоз HLA-DR3 / DRw52 17-кратно зголемен ризик од развој на белодробна фиброза. Откривање на SCL-70 антитела кај пациенти со изолиран феномен на Рејно укажува на голема веројатноста за развој на системски склеродерма.

Antitsentromernye антитела (ASA) се најде на 20% од пациентите со системска склероза (повеќето од нив има докази за CREST-синдром), барем - во примарна билијарна цироза (половина од овие пациенти, постојат знаци на склеродерма), а многу ретко - во хроничен активен хепатитис и основно пулмонална хипертензија. Антитела против центромер смета како негативен прогностички показател за развој на системска склероза кај пациенти со синдром на Рејно.

Антитела на aminoatsilsintetaze tRNA (antisintetaznye антитела) се откриени во присуство на пациенти со полимиозитис интерстицијална белодробна болест. Во принцип синтетаза антитела се детектираат во 40% од пациентите со полимиозитис, 54% од пациентите со идиопатска дерматомиозитис во случај на форми на овие болести и само 6% од пациентите со полимиозитис, еден од другите манифестации за време на туморот DBST- миозитис овие антитела не се откриени. Производи antisintetaznyh антитела е поврзан со развојот на т.н. "antisintetaznogo синдром."

Antifilaggrinovye антитела (APL) се фамилија, која ги вклучува antikeratinovye антитело antiperinuklearny фактор антитела Са-антигенот и антитела на неодамна опишани цикличен цитрулин-пептид кој содржи. Според современите концепти, главната антигенска детерминанта признати од страна на овие антитела е citrullinated пептиди, која, особено, присутни во синовијалната мембрана од пациентите со ревматоиден артритис (РА). АФА алгите се високо специфични за РА. Најмногу се користи се AFA во дијагнозата на почетокот РА. Неколку студии покажале поагресивен текот на РА, во присуство на овие антитела кај пациентите.

Антитела на фосфолипиди (APL) - хетерогена група на антитела кои реагираат со негативно наелектризирани (фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, кардиолипин) и неутрални (фосфатидилетаноламин, фосфатидилхолин) фосфолипиди. Тие вклучуваат лупус антикоагулант, кардиолипински антитела и фактори кои го детерминираат развојот на лажно позитивни Wasserman.

Лупус антикоагулант (LA) - имуноглобулини од класи IgG и / или IgM, го инхибираат ин витро еден или повеќе fosfolipidzavisimyh реакции коагулација, БА се третира како претставник на семејството на антитела на фосфолипиди, нивната синтеза е поврзан со развојот на артериска или венска тромбоза.

Антикардиолипински антитела (ACL). За да се одреди CLA користи метод имуно. CLA производи (особено при високи титри на IgG ACL), како и формирање на БА, е поврзан со развојот на антифосфолипиден синдром.

Лажно позитивна реакција Wassermann е брза серолошка дијагноза на сифилис со метод врз основа на стандардни кашеста маса флокулација фосфолипиди (кардиолипин) серумот на пациентот кој содржи анти-трепонемални антитела (reagin). За повеќе точна дијагноза на сифилис, со користење на методот имунофлуоресценција трепонема антиген.

Во 15-20% од пациентите со СЛЕ е откриен лажно-позитивни реакции Wassermann, а 30% од здравите индивидуи со лажно-позитивни реакции Wassermann во следните развој на СЛЕ. Многу често лажно позитивни Wasserman откриени кај пациенти со антифосфолипиден синдром.

Антинеутрофилни tsitoplazmatineskie антитела (ANCA). ANCA се фамилија на автоантитела насочени против специфични антигени присутни во цитоплазмата на неутрофили. Постојат два вида на ANCA дека утврдени со индиректен метод имунофлуоресценција користење на фиксен неутрофили апсолутна донатори алкохол. Антителата да предизвика дифузна протеиназа III (класична) и цитоплазматски сјај означена како k-ANCA или p-ANCA. Антителата против миелопероксидаза, еластаза и лактоферин се карактеризираат перинуклеарно Вид на емисија и назначени како перинуклеарно или p-ANCA. ANCA често се откриваат во системскиот васкулитис.

Стрептококен antistreptococcal инфекција предизвикува зголемување на титар на антитела. Одредување antistreptococcal антитела се користи за дијагноза на акутна ревматска треска (акутна ревматска треска) и на акутен гломерулонефритис.

Најмногу определување на антитела на стрептолизин О (ASL-О), стрептокиназа (ACK) и streptodezoksiribonukleaze (анти-DNase B). Зголемувањето на вируленција SLA-О се наоѓа во повеќе од 2/3 од пациентите со акутна ревматска треска, а само половина од пациентите со акутен гломерулонефритис. Максимална титар на антитела antistreptococcal идентификувани во текот на развојот на артритис и во текот на развојот на кардитис и хореа титри на овие антитела се значително намалени, со што се намалува дијагностичка вредност на овој тест.

Важно за дијагноза се реакција откривање на антитела по инфекција: Wassermann реакција, комплемент реакција фиксација со туберкулоза, pseudotuberculosis, Yersinia, шигелозите и други антигени, HBs-антигени, гонококните (Bordet-Gengou реакција) и бруцелоза (реакција Рајт-Heddlsona) антигени титар анти-Chlamydia антитела.

Криоглобулини - група на серумски протеини со абнормална способноста да се реверзибилни врнежи или формирање на гел на ниска температура. Криоглобулини може да се открие во разни болести на внатрешните органи, вклучувајќи ги и доста често во системската ревматски заболувања.

Во зависност од составот на криоглобулини е поделена на три главни типови. Тип I се состои од моноклонални имуноглобулини IgA или IgM, барем - моноклонални лесни ланци (Bence Џонс протеин). Тип II (забележани во т.н. мешани криоглобулинемија) составен од моноклонални имуноглобулини (обично ИгМ, ретко - IgA или IgG), антиглобулински има активност против поликлонални ИгГ. Тип III (забележани во т.н. мешани криоглобулинемија) се состои од една или повеќе класи на поликлонални имуноглобулини. Најчестиот вид на криоглобулинемија во ревматски заболувања е тој тип III се наоѓа во СЛЕ, РА, системска склероза, Сјогренов синдром.

Циркулирачките имуни комплекси (CIC). Зголемување на концентрациите рефлектира ЦИК воспалителни и имунолошка активност на патолошки процес во SLE, RA, серонегативни спондилоартропатии.

VI Мазур

Сподели на социјални мрежи:

Слични