Развој и употреба на методи за да се утврди серотип циркулира генотипови на вирусот на хепатитис Ц.

Хепатитис Ц вирусот (TOS) се однесува на vozbuditelyams исклучително нагласена хетерогеноста на населението. Се покажа дека пациентите со хронична HS поврзани со различни genotipamivirusa, различно одговори на вирусот interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS важно во епидемиолошки студии, бидејќи тоа им овозможува пренос на добро документирани патоген.

Целта на оваа студија - за да се оцени vozmozhnostimetoda serotyping да се утврди генотипови HS. Dlyaserotipirovaniya беше усвоен од оригиналниот метод, opisannyygruppoy истражувачите од Велика Британија под водство P.Simmonds (1993,1995). 12 кратки пептиди (18-19 амино киселини) ги претставуваат епитопи на протеинот NS4 6 генотипови фарма беа poluchenymetodom синтеза цврста фаза, за прочистување на преку хроматографија и vysokoeffektivnoyzhidkostnoy се користи како основа на имунолошка проба immunosorbentadlya со серуми soderzhaschimiantitela да NS4 протеин (анти-NS4) . Присуство на анти-NS4 podtverzhdalosv ELISA со мешавина на пептиди за serotyping или од страна на имуноблотинг (LiaTek HCV, Органон Teknika- Wellcozyme HCV Западен размачкана, Мурекс).

Специфичност утврдување генотипови тешки razarabotannymvariantom serotyping изучува со споредување на резултатите на "слепи" тест панел од 154 серуми против NS4-pozitivnyhobraztsov со познати генотипови (освен 1 примерок) дефинирана со користење на постапката опишана RFLP P.Pohjanpeltoet al. (1996) на Катедрата за вирусологија, Универзитетот во Хелсинки.

За потребите на студијата од ширење variantovvirusa ДХВ во некои области на Русија (Санкт Петербург, Нижни Новгород, Уфа, Белгород) и соседните земји (Белорусија, Казахстан, Грузија) од серотип беа тестирани анти-NS4-pozitivnyesyvorotki добиени од 474 луѓе, вклучувајќи 157 крводарители , 237 пациенти со хепатит Ц и 80 лица изложени на ризик (vnutrivennyenarkomany болните од рак, пациентите hronicheskogogemodializa центри, болници и други туберкулоза.).

Резултатите од "слепи" за тестирање 154 syvorotoks познат генотипови на вирусот на хепатитис Ц со RFLP презентирани маса №1. Во принцип serotipirovano 148 примероци (96,1%). Polnoesovpadenie sulfur- и генотипови забележани во 130 од 148 серум (87,8%). За одделни генотипови оваа бројка беше razlichnym.Naibolshaya фрекфенција што одговара резултати забележани за ХЦВ-1 - (92,5%), со растера индекс од 87,1% за серуми subtipa1v до 100% за серуми со мешани подтипови 1а + 1v- за HCV- 3- 94,3% (сите серум третирани подтип 3а). Најмалиот резултати protsentsovpadeniya забележани при тестирање на серум на RFLP припаѓаат на ХЦВ генотип 2 (80%). Кога 5 serotipirovaniibylo откриени серуми кои би можеле да се припишат на genotipuHCV-4. Сепак, кога ќе се споредат резултатите со sovpadenieotmecheno RFLP податоци само 2 примероци (40%).

резултати за откривање на висока корелација genotipovvirusa ГШ доби две сосема различни методи за проучување pozvolilaispolzovat серотип циркулира ГШ variantovvirusa во одделни територии. Резултатите од овој дел issledovaniysummirovany во Табела №2. Во принцип, сите студирал territoriyahvyyavlena циркулација 3 генотипови HS во еден sluchayahv четири региони што е дефинирано HCV-4 генотип. Најчесто opredelyalsyagenotip ХЦВ-1 (од 47,1% во серум од Грузија до 74,4% - од Белорусија) .Vtoroe место пласман на стапка на откривање на сите територии окупирани prakticheskina ХЦВ генотип 3 (15,5% во серум од Belorussiido 34,0% - од Нижни Новгород). Многу помалку студирал syvorotkisoderzhali тип-специфични анти-HCV NS4-2. Максимална chastotavyyavleniya овој генотип е инсталиран во серум на Белорусија (12,7%), Казахстан (13,7%), а најмалку - во серум од Санкт Петербург (3,8%). Во 35 серуми од сите региони изучува, со serotyping дека е утврдено присуство на анти-NS4 различни генотипови (генотипови се меша). Најголем процент на серуми од smeshannymigenotipami примероци направени во која и двете opredelyalisHCV-1 и ХЦВ-3 (26 од 35 - 74,3%), односно најчесто vstrechayuschiesyagenotipy. Други варијанти комбинации исполнети znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11,4%). HCV-1 + HCV-4 во комбинација откри две серуми од Грузија (5.7%).

Материјали на оваа студија svidetelstvuyuto дека употребата на синтетички пептиди, sootvetstvuyuschihantigennym Детерминанти на неструктурни протеини NS4, во kachestveosnovnogo компонента имуносорбентна ELISA овозможува uspeshnoopredelyat генотипови на вирусот во серумот на заразени фарма etimvozbuditelem луѓе и да се следи региони циркулацијата genovariantovvozbuditelya.

За да се утврди генотипови како тешки ispolzovanmetod PCR-RFLP со тип-специфични ограничување fermentamiBst U1 и БСТ N1 и последователната анализа на ограничување производи со помош на хоризонтална електрофореза во 3% агарозен гел (ThiersV. Et al., 1997). Овој метод е тестиран серум на пациенти со хронична krovi15 ГШ примаат интерферон. RNKvirusa GS откриени во 14 примероци, додека во 6 случаи (42,9%) монтирани subgenotip 3а, 3 (21,4%) - 1 gentip (2- subgenotip1v 1 - subgenotip 1а). GS РНК вирус, изолирани од 4 до obraztsovotnosilas ретко забележливата патоген генотипови - 4/5. Poslednienahodki бара понатамошно испитување.

Табела 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA Со METODAMI RFLP и SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - не tipipovalos ** - abs.chislo / процент;

Табела 2. CHASTOTA ОТКРИВАЊЕ PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA со методи SEPOTIPIPOVANIYA ХА OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii И SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok со dannym генотип /% (100 nA со syvopotok ukazannoy teppitopii)

референци:

1. 1.Pohjanpelto П., Lappalainen М., Widell А. et al.// Clin.Diagn.Virol. на 1996 година. -Vol.7. -P. 7-16
2. 2.Simmonds P., Холмс E.C., Cha T.A. et al.// J.Gen.Virol.-1993-Vol.74.-П. 2391 -2399