На поларизација на флуоросцентен метод антитело. корелација на имуноглобулин

За да се одговори на прашањето за постоењето на независна ротација подединици на имуноглобулини голема помош беше метод на флуоресценција поларизација. Основниот пристап кој се користи во овие експерименти за проучување на имуноглобулини флексибилност состои во споредување на експериментално утврдено време корелација на имуноглобулин молекули, кои се наоѓаат во експериментот карактеризирање време-молекула на авион поларизирана светлина, со текот на времето корелација пресметува врз претпоставката дека цврстината на молекулата.

Значи, ако се претпостави дека молекулата IgG крути елипсоид ротација оска со сооднос од 1: 2 и молекуларна тежина од 150.000, времето на корелација на молекулата мора да биде еднаков на 73 nsec и експериментално почитуваат, тоа е обично многу пониско: 20-40 nsec. Оваа укажува на способноста на фрагменти на независна релативно движење а со тоа и флексибилни поврзување на делови од синџирите полипептид. Слични податоци се добиени од страна на спин етикети.

Stayer и Грифит (Stryer, Грифит, 1965) за одредување на време корелација на спин-етикета хаптен обврзана да антитело, а студирал на однесување од материја која содржи и група fluorochrome, етикета се вртат и различни решенија вискозитет.

Со промена на вискозитетот решение со додавање на глицерол, постигнува својата EPR спектар се совпаѓа со спектар на спин-етикета хаптен врзан за активно место. Следно, начинот на флуоресценција поларизација е одредено од времето на корелација. Така пронајден е пронајден време корелација N-О група поврзани спин-етикетирани хаптен да биде 12 nsec. Авторите правилно да се напомене дека оваа вредност може да биде премногу ниски во споредба со времето корелација Fab-фрагмент, бидејќи не може да се исклучи можноста за ротација на прстен во однос imminoksilyyugo dinitrophenyl група, цврсто поврзани со активно центар. Овој недостаток е заеднички за сите обиди да се одреди времето на корелација на IgG-Fab фрагмент користење на спин-етикетирани хаптен.

">

Хсиа и Piette (Хсиа, Piette, 1969) за утврдување на корелација времето поврзани со активно центарот на спин-етикета хаптен, зависноста калибрација на вискозноста на EPR спектарот на етикета решение центрифугирање. време на корелација одговара на одредена опсег, утврдени со закон Стоукс "- Ајнштајн, со оглед дека ефикасно Стоукс радиус на марката е 5 А. Најкраткиот спин-етикетирани хаптен повеќето цврсто врзани за активниот центар, имаше време корелација на 39 nsec.

Dweck et al (Dwek д. a., 1975a) пресметан време корелација на спин-етикетирани DNP локализиран во активни центри ИгА (MOPC 315) и Fab- и ФВ-fragmsntov. Тоа беше резултат да биде 44,4, 23 и 6,5 nsec, соодветно.

добиени зајак антитела директно се против, се вртат етикета 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-амино (N-dichlorotriazine) служи со имунизација со хаптен. На резултат на формирање на специфични комплекси на антитело, и пептичен фрагменти papannovyh со етикета се вртат ја има својата силна имобилизација. Мешање соодветни количини на решенија неспецифични зајакот IgG и етикети слични услови резултираа само со појавата на ИПР спектар на слободен етикета. Ознаките за време корелација пресметано со Shimshiku и Меконел (Shimshick, Меконел, 1972). тоа беше резултат да биде 32, 30 и 18, соодветно nsec за комплекси се вртат етикета со антитело, Fc- и Fab-фрагменти во изоелектричната точка (pH 6.3).
Добиените вредности времето корелација ИгГ да Fab-фрагменти и потврдени во цитираниот труд.

Разликите во време корелација, добиени за Fab-fratmenta како изолиран и е дел од F (ab) 2 и недопрена антитело покажуваат ограничувања на слободата на ротација Fab-фрагменти, субединици наметнати од страна на реакција на F (ab) 2 и IgG. Зголемување на температурата резултира во намалување на се сведе на стандардни услови (3 * 105 P / ° C), времето на корелација етикети комплекси со F (ab) 2 и IgG.

Очигледно, кога ќе се загреат слобода релативно поместување нив подгрупата се зголемува. Можноста за добивање на антитела на етикетата спин, сервира од страна на имунизација со хаптен се потврдува и во една друга студија (Хамфрис, Меконел, 1976).