MRNA е вклучен во синтезата на антитело. Методи на проучување на mRNA

Во моментов, два пристапа - хемиски и имунохемиски. Првата е врз основа хемиски фракционирање на mRNA изолирани од клетки кои произведуваат имуноглобулини. Главните чекори се: избор на mislomnyh клетка или мембрана микрозомални-врзани полирибозоми (Stavnezer ЕА, 1971- Milstein и e 1972 ....) - екстракција РНК од нив под услови кои ги спречуваат градиент degradatsiyu- RNA фракционирање густина saharozy- избор фракции што одговара на големината на наменет за прочистување на mRNA по колона рибозомална на РНА со олиго ((1T) - или поли (U) -cellulose (или Sepharose), само богат одложување adennlovymi бази на mRNA (polyA mRPK), и проучување на биолошки активност посветен Ип акции.

Во некои случаи, понатамошно прочистување mRNA препарати користени polnakrplamidnom гел електрофореза во присуство на 99% формамид (Farace e. a., 1976- Matthyssens ови. a., 1976). Со овие или други варијации на горенаведените шема во моментов е во употреба од страна на големо мнозинство на истражувачите. Принос индивидуални polyA mRNA обично е 0.01% од износот на РНК воведе (Brownlee e. A., 1973). Како резултат на тоа, моментално распределени NZ plasmacytomas MOPC 70E, MOPC 21, 41 MOPC неколку mRNA кодирање и на H и L-синџир. Чистотата на поголемиот дел од овие лекови не надминува 40-60%.

Само една група автори неодамна успеа на таков начин да се добие mRNA од страна на повеќе од 90% чистота (Matthyssens д. a., 1976). Ова не е изненадувачки. Се користи метод е базиран, прво, на поделба на РНК молекули во согласност со нивните молекуларна тежина и, второ, на одделот за население напои содржи RNA лишени од него.

Нормално, клетките може да презентираат голем број на mRNA со слични својства кои не се поврзани со имуноглобулини. Сите овие неизбежно ќе го контаминираат РНК подготовките на индивидуалните имуноглобулин РНК. Очигледно, тоа ќе биде или поголеми или помали, во зависност од релативната процент на имуноглобулин синтетизира од страна на клетките на овие нечистотии.

Затоа, за изолација mRNA на миеломи, синтеза имуноглобулин во кои 30-40% од синтеза на сите протеини во целина, овој метод може да биде ispolzovan- во исто време да се изолира на mRNA го кодира синтеза на имуноглобулини од нормално лимфоидни ткива, особено на високо хетерогени клетки состав на слезината тоа е јасно несоодветни.

многу повеќе перспектива, Од наша гледна точка, тоа е имунохемиски пристап кон решавање на овој проблем. Нејзината предност лежи во фактот дека веќе на првиот чекор на фракционирање вклучува строго специфични индивидуални полирибозоми Одбирање со употреба на антитела на протеини синтетизира од страна на овие полирибозоми. Постојат три варијанти на овој метод. Потекло - таложење полирибозоми антитела на протеини синтетизира во присуство на превозникот, односно истиот протеин (coprecipitation) .... (Delovitch и Е, 1972- Ласков, Mitelman, 1975).

Второ - за обработка на полирибозоми антитела на протеини синтетизира од нив и таложење на комплекс што резултира антисерум да антитела (индиректна врнежи) (Schechtcr, 1973, 1974a). И третиот - извлекување на индивидуални полирибозоми преку immunosorbents содржат ковалентно или не-ковалентно поврзани антитело синтетизира на полирибозоми протеин (Сидоров et al, 1973- Сидорова со, 1974- Lubimova et al, 1975 ....). Од добиени на тој начин индивидуални полирибозоми или на друг начин polysomal РНК беше извлечена и mRNA отстранет од страна на кој поминува од смесата преку колона со олиго- или поли (U) -cellulose. Користење имунохемиски пристап успеа во добивање на mRNA подготовките околу 95% чистота.