Хибридизација на mRNA и ДНК антитела. Локализација V- и гени во геномот на имуноглобулини

Во експериментите на хибридизација различни mRNA и ДНК, особено во почетокот обично добиени двофазен крива со транзиција зона во еден регион и втор ниска - во високи вредности на Cot4l.

Се користи за угнетување хибридизација Без етикета mRNA, кодирање L-синџир на хомологни или Хетерологниот C-региони веќе е дозволено да се утврди дека високи вредности се должи на хибридизација Cotih C ген и дека бројот на овие гени не надминува две - четири по хаплоидниот геном. Присуството на областа, со ниски вредности Coth дел истражувачи сметаат како доказ на значителен број на "герминативниот» V-гени. Сепак, зголемување на чистотата на препарати на mRNA и употреба на mRNA фрагменти, а содржат и polyA секвенца открива дека V-гени, исто така, се уникатни, и дека тие се претставени во геномот во износ не е подолг од две или три копии во последните години.

Размислете за пример на податоци хибридизација експерименти на mRNA, кодира синтезата на ламбда-L-синџирот на глувчешки миелом MOPC 104E со ДНК од црниот дроб myshn (Matthyssens e. a., 1976). Врз основа на податоци за примарната структура на V-региони на сите во моментов истрага ламбда синџирот на глувци (18 примероци) поделени во седум подгрупи. Ако за секој V-регионот постои посебен V-ген, тоа мора да се открие 7 V-гени во геномот на глушец. Во фактот нивниот број не може да биде помал од 145 (под овој услов, веројатноста за откривање на седум различни подгрупи во студија вкупно 18 примероци се зголемува до 90% - 50% веројатност на бројот на V-ген мора да биде најмалку 25). хибридизација е утврдено од крива што V-ген за L-синџирот MOPC 104E се повторува во геномот на не повеќе од 2-3 пати. Во исто време, степенот на сличност на два mRNAs кодирање за синтеза на два ламбда синџири, дури и припаѓаат на две различни под-групи (MOPC 104E и Nors 2020), многу голем. Екстраполација на овие податоци со остатокот на mRNA кодирање ламбда синџир, може да се заклучи дека со оваа сличност меѓу V-домени од овие синџири L-mRNA MOPC 104E ќе има gnbridizovatsya со сите од нив и, според тоа, вредностите Креветче би требало да биде значително помал отколку што е дефинирано во експеримент (на повеќе повторувања, на намалување на вредноста Креветче ,,,). Овие податоци укажуваат на тоа, против присуството во геномот на голем број на V-гени и затоа во корист на соматски мутации како примарен фактор, обезбедување на различни антитела (имуноглобулини).

Тоа треба, сепак, да се напомене дека метод хибридизација Тоа е прилично комплицирано и, очигледно, не дозволува да се јасно да се интерпретираат резултатите. Така, за разлика од експерименти што е опишано погоре, со користење на cDNA да V- и C-домени во посебно (cDNA и kDPKs) беше пронајден хибридизација kDNKu висока специфичност на mRNA (Smith, 1977- Stavnezer, епископ, 1977). Констатирано е дека додека kDNKs подеднакво хибридизира со сите mRNA кодирање типот на L-синџирот капа kDNKu реагира само со капа хомологни mRNA. Ова покажува дека бројот на V-гени се определува со хибридизација може да биде потценет.

Во исто време, методот хибридизација Тоа се покажа како многу корисна за проучување на локализација на V- и C-гени во мобилните геном. Неодамна, овој метод беше во можност да се покаже на соматски реорганизација на гени кои кодираат на V- и C-регион на имуноглобулин. Се покажа дека во ембрионски глушец геном V- и C-gsny одделени, додека во тумор (плазма-гнида MOPC 321, Nors 2020), што се наоѓа во близина на (споен).

криви mRNA хибридизација на ДНК, добиени од клетките на црниот дроб и миелом, беа речиси идентични. Ова значи дека во клетки кои произведуваат имуноглобулини, не постои засилување на гените кои ги кодирање.

Така, во сегашно време пронајден, геном кој има 2 или 3 од генот кој шифрира V-регионот на ламбда синџири, 2 или 3 од генот кој шифрира V-регионот на синџирот на капа, и 2-4 на генот кој го кодира регион C на L-синџири.

Прво, постои Соединение V- и C-гени, тогаш ова парче на ДНК плус 200-450 непреведен нуклеотиди транскрибира во mRNA дека по се приклучи на крајот 200 3`-polyA нуклеотидна транспортира до цитоплазмата и е вклучена во полирибозоми, кој го енкодира синтезата на прекурсори на полипептидни синџири на имуноглобулини.

По раскинувањето на прекурзорот ekstrapeptidov (И можеби и пред) почнува монтажа на имуноглобулин молекули, да ги пренесе во микрозомални везикули и или секреција или вградување во клеточната мембрана.