Гените синтетизирање на антитело. Бројот на гени кои се вклучени во синтезата на имуноглобулини

основно истражување структура и генетиката на имуноглобулини Тоа доведе до заклучок дека секое nolipeptidnaya синџирот е кодиран од страна на најмалку два гени: V-генот одговорен за варијабилен регион и C-gepami одговорен за постојана региони на молекули. На број на двете гени во геномот на клетки е на основните интерес. Фактот дека набљудуваните разновидност на антитела од различни автори објасни или во однос на "никулци" теорија на гените, според кој во геномот на еден сет на гени за сите познати V-домени, односно. Е. Многу илјадници V-ген, или од гледна точка на теоријата на соматски мутации при што еден сет на V-гени во геномот е ограничен, и различни структури на имуноглобулини (антитела) се јавува како резултат на соматска мутација. Исто така постои компромис гледна точка. Сите овие идеи исцрпно дискутира за да стане лидер и ко-автори (Ледер д. A., 1974), со што повеќе податоци нема да ги запре.

Имајте на ум дека е направен AE Gurvitch и Р. С. Nezlin (1965) оригиналната претпоставка дека одделни делови на геномот се кодираат антитела и активни центри и на тој L-II-и DITS "се собираат" на помали, независно еден од друг синтетизира синџири. Тоа е исклучително интересно е дека по пет години, овие идеи повторно се појави во форма на хипотезата за "спроведување» ( ​​«вметнување») информации кодирани од полинуклеотидите на мал (околу 30-45 нуклеотиди), обезбедување на достапност на CDRs во H и L-синџири (Ву, Kabat, 1970).

завршно одговорот на овие прашања, Очигледно, тоа само може да обезбеди директен определување на V- и C-гени во геномот. Изолација на mRNA препарати со висок степен на чистота соодветните дозволи почеток експерименти. Пристапот развиен од страна на голем број на години, е да се утврди бројот на гени од РНК-ДНК хибридизација. Од структурата на mRNA транскрибирани структура целосно комплементарна ДНК дел, тогаш овој метод може да се утврди бројот на гени и за да се утврди дали нивните амплификација се случува (на множење) за индукција на синтезата на имуноглобулин.

Во моментов, истражување овој вид се врши со mRNAs, кодира синтезата на L-ланци како доволно чиста препарати на N-mRNA уште не е добиен. Суштински услов за извршување на овие експерименти е, прво, чистотата на подготовка на mRNA и висока специфична активност и, второ, присуството на еден многу голем вишок на ДНК. Земете vysokomechenye mRNA дрога е тешко. Обично ова е направено со користење на mRNA изолирани НТ култивирани клетки во присуство на високи дози или 32 P-3H- predshsstvennikov или повеќе - mRNA означени со 125 I in vitro (Farace ЕА, 1976- Matthyssens, Е, 1976 ....). Постои, исто така, индиректно верзија на методот. Се состои во тоа што на прв од страна на реверзна транскриптаза на mRNA подготвени матрица vysokomechenuyu комплементарна ДНК (cDNA), и што е веќе се користи за хибридизација во клеточната ДНК (Шехтер e. А., 1976- Storb e. A., 1976).

Прочистениот mRNA или cDNA хибридизиран со денатуриран одредени услови (sonication) или ДНК од црниот дроб на глушец миелом NS клетки и процентот на врзани RNA (или cDNA) како функција на времето на хибридизација. (Утврдувањето е врз основа на стабилноста на хибриди да RNase ефект.) Под овие услови, процентот на hybridized RNA (cDNA) (ѓ) зависи од концентрацијата на RNA (cDNA) (Ro), концентрацијата на ДНК (C) и на инкубација пати (ѓ). Со многу голем вишок на ДНК не зависи од f R0, и зависи само од Ц "и t (Креветче). Креветче количината, во која хибридизација е 50%, очигледно зависи од степенот на комплементарност на ДНК и mRNA (cDNA).

степен на хомологија од две mRNA (И оттука нивната V- или S-ген) се определува во конкурентна експерименти инхибиција на хибридизација на означените подготовка mRNA необележана лекови хомолошка и Хетерологниот mRNA, или со изолирање на ДНК од формирана хибрид, и неговите хибридизација со други означени хомолошка и Хетерологниот mRNA. Споредувајќи ги овие резултати со податоци за примарната структура на оние полипептиди кои се енкодирани со mRNAs испитани, што може да се види дали крива е дефинирано од страна на фреквенцијата на повторување на хибридизација на гените со проценета од податоците за хомологија V- и C-домени.