VWF антиген: Методи за утврдување на

На површината на пластични бунари на плочата sorbed антитела на von Willebrand фактор. Во првата фаза на истражување во бунарот на микроплоча се додаваат БТП примероци. VWF молекули се фиксирани на соодветниот антитела и остануваат врзани кога ги изми. Во вториот чекор во и анализа на правење поликлонални антитела. На следната фаза на истрага во добро на chromogen решение е додаден. Оваа супстанца е насликан по ензим варење. Интензитетот на боење зависи од содржината на von Willebrand фактор.

Имунолошки метод за одредување на фон Вилебранд фактор исто така може да се спроведува со користење ракета електрофореза.

На коефициент на варијација на ELISA за определување на vWF: Аг е помала од 10%.

Видео: Одредување на крвна група и Rh фактор

Реагенси и опрема

• Измијте Тампон концентрат (pH 7,3).
• инкубација пуфер (PBS- pH 7.3).
• Лиофилизирана стандарди.
• Лиофилизирана контролните примероци на ниско и високо ниво.
• Коњугатот на поликлонални антитела.
• раствор супстрат.
• Стоп за решение.

Видео: крв (крвна група антигени, Rh) [Тоа е едноставна]

Дистрибутер дијагностички комплет на реагенси - ЗАО "BIOHIMMAK".

Примероци на крв за истражување

За извршување на факторот на тест Willebrand-користење на ЈПП.

техника перформанси

Изградба на калибрациона крива. Понатаму, потребно е да се конструира калибрациона крива со користење на линеарна координатен систем. За изградба на калибрациона крива користејќи вредност на апсорпцијата добиена со разредување на мострата со позната концентрација на von Willebrand фактор. На x оската се применува на концентрации на vWF: AG во U / ml или проценти (1 U / ml = 100%) и на оската y укажува на апсорпција. Во оние случаи каде што има примероци чија апсорпција вредност поголема од вредноста на највисоката точка на калибрација, тие мора понатаму да се разреди со инкубација тампон (1 + 1) и повторно тестирање. Тој начин што резултира концентрација на мерење треба да се помножи со факторот на разредување.

Евалуација на резултатите од студијата

Концентрацијата на vWF: Ag кај здравите луѓе варира. Прописи зависи од верзијата на дијагностички комплет, опрема, крв, реагенси, и многу повеќе, така што не постои општо прифатените нормалните граници при мерење на овој индикатор. нормалниот опсег обично е наведено во упатствата на производителот на реагенси за определување на von Willebrand фактор, но многу производители препорачуваат дека секоја лабораторија воспостави свој опсег на нормални вредности. Важно е да се запамети дека просечните вредности на ниво на овој протеин со I крвна група е за 10% пониска од онаа на другите пациенти кои секогаш треба да се смета во дијагнозата на хеморагична болест.

Причините за грешки

• Отсуството или неефикасноста на системот на внатрешна контрола на квалитетот. Во моментов на располагање примероци на сертифицирани референтни материјали вредности со von Willebrand фактор. Со оглед на присуството на фундаментално различни методолошки пристапи за определување на протеини, мора внимателно да ја проверите верзијата на оваа студија, за која е сертифицирана примерок за тестирање.
• Неправилна дозирна на цитрат во оградата на венска крв. Недостаток на натриум цитрат, бидејќи на ниски хематокрит и хемолиза доведе до грешки и не-репродуктивна резултати.
• Хемолиза.
• Зголемување на vWF забележани во стресни ситуации за време на вежбање, бременост, крварење, хипертензија, заразни болести, естрогенска терапија. Кај жените, во различни денови на менструалниот циклус може да биде флуктуации во концентрација од von Willebrand фактор. Да се ​​стандардизираат на хормонални влијание врз содржината на мултимерни протеини, некои експерти препорачуваат да се дијагностицира von Willebrand-ова болест кај жените помеѓу 5-ти и 7-ми ден од менструалниот циклус.

Други аналитички техники

За жал, не постои единствена постапка која може да ги земе предвид сите од многуте варијанти на овој протеин аномалии, сепак за дијагностицирање VWD има развиено група на лабораториски испитувања. Основни методи на истражување се користи за да се идентификуваат недостатоците или квалитативната абнормалност на von Willebrand фактор, врз основа на употреба на ензимот техники на имунолошка проба. Исто така, за дијагноза на болеста ефикасно учат функција на агрегација на тромбоцитите нормално третирани со ристоцетин додавајќи PRP истрага. За целите на квалитативна разлика нарушувања молекула на овој протеин вработени и други методолошки пристапи.

Одредување на-ристоцетин кофактор активност на von Willebrand фактор

Формалин третираат тромбоцити ја губат способноста за вршење на многу од нејзините функции, r. Х. единици Формирање и функција во одговор на додавање на најпознатите функција индуктори агрегација, но со додавање на ристоцетин во мешавина на таквите тромбоцити и плазма студија тие брзо agglutinate. Во овој тест систем сериозноста на аглутинација е директно зависна од присуството на von Willebrand фактор, но со намалување на концентрацијата на овој протеин или неговиот квалитет инфериорност како аглутинација слабо изразени или отсутни заедно. Постојат две опции prinitsipialno слична методологија за утврдување на-ристоцетин кофактор активност на von Willebrand фактор. Потекло - квантитативно, за неговата имплементација бара aggregometer, вториот - семиквантитативни, тоа подразбира визуелна проценка на времето на појавата на agglutinates во смеса раствори на плазма тест, и ристоцетин формалин третирани со тромбоцити. И двете методи имаат коефициент на варијација помалку од 10%.

Дијагностички методи потребни за да се разликува различни верзии на von Willebrand болест

Одредување на колаген-врзувачки активност на факторот на von Willebrand. На адхезија на тромбоцитите на subendothelial колаген влакна реализира преку тромбоцити на рецепторот GP-Ib / V / IX. Оваа интеракција бара vWF како кофактор, така што во аномалии мултимерни протеини или неговите недоволниот капацитет нарушен тромбоцитите се врзува за рецепторите на колаген. За да се одреди колаген-обврзувачки активност бара сет на реагенси и опрема за вршење на ELISA. Нејзиниот коефициент на варијација не надминува 15%.

Одредување на мултимерни фон Вилебранд фактор. Модерни диференцијалната дијагноза на повеќето варијанти на тип 2 VWD исто така врз основа на проучувањето на мултимерни фон Вилебранд фактор. Да се ​​оцени способноста на овој протеин за формирање мултимери повеќе се користи имунолошкиот електрофореза. Постапката за утврдување на мултимерни доста комплицирано, бара опрема за имунолошкиот електрофореза, погодни за спроведување во специјализирани лаборатории вршат рутински имунолошкиот електрофореза, дијагностички китови за нејзино спроведување не е. Информации за сензитивноста и специфичноста на оваа дијагностичка метода во современата литература не е застапена, но постојат извештаи на претходно непознати верзии на мултимерни протеини, што некои експерти сметаат како дијагностички артефакти.

Одредување на натрупувањето на крвните плочки со ристоцетин (R1PA). Повреда на тромбоцитната агрегација предизвикана со ристоцетин е честа лабораторија Вилебрандова болест манифестација. Ова отелотворување за идентификување на високо специфични подтип 2B von Willebrand-ова болест во која има ненормално висок агрегација во одговор на додавање на ниски концентрации на ристоцетин. Со други аномалии, овој метод е само од второстепено значење, бидејќи тоа е вообичаената доза може да биде прекината поради различни олицетворение на оваа патологија. За спроведување на оваа техника бара aggregometer и ристоцетин. Репродуктивност студии на агрегација со ристоцетин голема мера зависи од aggregometer модел, искуство и обука на персоналот.

Видео: крв групирање со вкрстен оган и Rh фактор