Тест тромбин генерација

Овој методолошки приод беше предложен од страна на британските истражувачи во 1953 година за да се оцени состојбата на системот на хемостаза во хемофилија. Треба да се напомене дека, сепак, истакна дека предложениот метод во оригиналната беше многу далеку од совршен, така и за долго време, таа не беше дадена сериозно внимание. Со вториот метод на раѓање преживеа благодарение Hemker Конрад, кој има направено бројни подобрувања во постапката за анализа во 90-тите години на минатиот век. Најважната промена Hemker К. et al. е употребата на flyuoro- и chromogenic супстрати за откривање на генерација на тромбин, со што значително зголемување на продуктивност на методот. Во конкретниот олицетворение, методот на тромбин формиран за време на реакција уништува пептидот супстрат кој предизвикува ослободување на молекулот на флуорофор. промена на интензитетот на емисиите е откриен од страна на флуорометар во редовни интервали.

принципот на методот

На тест се базира на одржување на брзината на хидролиза на пептидна врска fluorogenic супстрат специфични за тромбин. Одредување на подлогата флуорометар стапка на фрактури се врши во бунари на 96-и плоча, во која мешавина беше инкубираат PRP примерок со коагулација активатор. Како употреба активатор на рекомбинантна ткивен фактор реагенс и калциум хлорид и да се стандардизираат и да се подобри стапката на коагулација во тест систем се додаваат фосфолипиди. Студијата на кинетиката на генерација на тромбин ни овозможува да се процени состојбата на прокоагулантни и антикоагулантни механизми.

Реагенси и опрема

• Рекомбинантна човечкиот фактор ткиво (1 pmol).
• Специфични тромбин fluorogenic супстрат.
• раствор пуфер кој содржи калциум хлорид.
• Калибратор со активноста на човековите тромбин 580 nmol.
• Флуорометар.

Примероци на крв за истражување

Како thromboelastogram снимање примерок користат БТП. Голем број на студии за сметка за придонесот на тромбоцити во производството на тромбин сугерира користење на плазма богата со тромбоцити. Тестот е многу чувствителна на дефекти и има пред-аналитички фаза на студијата.

Видео: Предавање 29 - Тест методи генерација

техника перформанси

истражна постапка се врши во согласност со упатствата за користење на опрема и алгоритам на компјутерска програма која пресметува динамиката на главните индикатори на генерација на тромбин.

Евалуација на резултатите од студијата

Fluorogenic супстрат специфични за тромбин, така што промената на интензитетот на Луминисценција по додавање на коагулација активатор пропорционална на стапката на производство на ова копче коагулациони ензим.

По калибрација стандардна сума на тромбин флуорометар овозможува да се изгради една крива на производство на тромбин. Студијата оценува доцнењето време на формирањето на тромбин (временско задоцнување), максималниот износ на тромбин (Peak тромбин), време е да се постигне максимална тромбин (ttPeak), како и ендогениот тромбин потенцијал (ETP).

Толкување на резултатите од истражувањето

Бидејќи коагулационен фактор е клучен ензим на коагулација хемостаза, тест тромбин генерација е вреден показател за составен коагулацијата на крвта.

Резултатите од тестот зависи од начинот на активирање на концентрацијата на коагулација активатор, и многу други фактори, така се менува условите техника овозможува да се прилагоди за да се открие различни дефекти во хемостатскиот систем. Така, додавање на тромбомодулин во тест систем помага да се идентификуваат хиперкоагулабилна смени во мутации позадина leydenovskoy. Студија на создавање на тромбин во плазма богата со тромбоцити го прави возможно да се открие на дисфункција на тромбоцитите хемостаза Glantsmana thrombasthenia, синдром на Бернар-Сулие и други.

Најчесто се користи за активирање на коагулацијата БТП ткиво фактор кој им овозможува да се оцени состојбата на коагулација. Оваа претстава кај пациенти со хемофилија време и други коагулопатии мерка заостанување се издолжени и ETP и Peak тромбин на намалена. Интензитетот на овие промени во такви пациенти зависи од активноста на факторите на коагулација VIII и IX.

Причините за грешки

Грешки preanalytical фаза од студијата, во Vol. Х. Погрешна доза на цитрат во ограда од венска крв.

• Дефектите центрифугирање на добивање на PRP примероци.
• Контакт со хепарин студирал крв од венски катетер.
• Хемолиза.

Други аналитички техники

Во подготовка други аналитички техники кои се способни за визуелизација на процесот на коагулација, како што се начинот на евиденција раст на просторните тромб и thromboelastography. Сите овие техники се визуелизира згрутчување на крвта и се во можност да се пресмета интегрален параметри коагулација, но нивните дијагностичка специфичност се уште е на ниско ниво.