Лабораториска дијагноза на заразни болести

Општи типови на тестови вклучуваат микроскопија, тест култура, имунолошки тестови (тестови на аглутинација, како што латекс аглутинација, ензимски имуно, Western blot, врнежите тестови и дополнување фиксација тестови) и методите за идентификација на нуклеинска и не-нуклеинските киселини. Обично култура на тест - е златен стандард за идентификација на микроорганизми, но резултатите не можат да бидат достапни за неколку денови или недели. Покрај тоа, патогени може да биде изолирана во областа на културата, што ги прави корисна алтернатива тестови. Кога патоген врши тест културата, и е идентификувана, лабораторијата исто така може да се оцени неговата чувствителност на антибиотици.

Некои тестови (на пример, Грам боење, вообичаените аеробна култура) може да се открие широк спектар на патогени. Во исто време, некои патогени не може да се идентификува во анализата. Затоа, лекарите треба да бидат свесни за ограничувањата на секој тест за одредени микроорганизми. Во такви случаи, лекарите треба да побара тестови кои се специфични за осомничениот патогенот (на пример, специјални бои или медиум за култура) или да препорача одредени лабораториски тестови за да се изберат.

микроскопија

Микроскопија може да се направи брзо, но точноста зависи од искуството на лабораторијата работник и квалитетот на опремата. Инструкции често се ограничи употребата на лекарите микроскопија за дијагностички цели е заверен лабораторија.

Повеќето примероци третирани со бои кои боја патогени кои ги прави издвоите од толпата, иако тие може да се користи влажни препарати необоени мостри за откривање на габи, паразити, информативни клетки од вагината, мобилни организми (на пример, Trichomonas) и сифилис (микроскопија, darkfield ). Откривање на габи може да се подобри со користење на 10% калиум хидроксид за да се раствори на околните ткива и не-габични организми.

Клиничарите бара сликарство врз основа на веројатност патогени, но не и боење не е 100% специфични. Поголемиот дел од примероците обработени од страна на Грам боење, и ако осомничени за микобактерии, што киселински-боење. Сепак, некои патогени се тешко да се види кога ќе се користат овие методи. Во такви случаи бараат различни верзии на бои или други методи за идентификација. Од микроскопски за откривање на микроби генерално се бара со концентрација од околу 1h105 / ml, повеќето примероци од биолошки течности (на пример, CSF), концентриран (на пример, од страна центрифугирање) пред да се анализа.

грам. Грам класифицира бактерии според тоа дали тие го задржи кристално виолетова дамка на (грам-позитивни - сино) или не (грам - црвено). Покрај тоа, таа покажува мобилен морфологија (на пример, бацили, коки) и нејзината организација (на пример, кластер со синџирот diploids). Таквите карактеристики може да помогне во пред-селекција на антибиотици, додека чекаат за конечната идентификација. За да се произведе боење по Грам, лабораториски материјал се загрева и фиксни примерок на слајд, а потоа обоено последователно со боење по Грам виолетова, јод, ацетон и контрастен боја (обично safranin).

Киселина и умерена (модифициран) киселина бои. Таквите бои се користат за да се идентификуваат киселина отпорни организми (Mycobacterium sp.) И умерено киселина отпорни организми (особено Nocardia sp.). Овие бои се исто така корисни за боење на родови Rhodococcus и слично, како и ооцисти на некои паразити (на пример, Cryptosporidium).

Иако откривање на микобактерии во спутумот бара само околу 5 000-10 000 микроорганизми / ml, микобактерии често се присутни во телото на човекот на пониските нивоа, па чувствителноста е ограничен. Обично неколку ml спутум деактивирање на натриум хидроксид и концентрирани со центрифугирање за киселина-боење. Ова ја подобрува дијагноза, иако некои умерено киселина отпорни организми се тешко да се разликува од микобактерии.

флуоресцентни боење. Таквите бои овозможи откривање на патогени на пониски концентрации (1x10⁴ клетки / ml). Примери - акридин портокал (бактерии и габи), auramine родамин и auramine O (микобактерии) и kalkoflyuor бела (габи, особено дерматофити).

Соединение со флуоресцентни боја за да се антитело насочено кон патоген (директна или индиректна имунофлуоресценција) ја зголемува чувствителноста и специфичноста на дијагнозата. Сепак, овие анализи е тешко да се читаат и интерпретираат, и неколку (на пример, анализи директно флуоресценција и Pneumocystis Legionella антитела) се комерцијално достапни и најчесто се користи.

боење мастило. Оваа боја се користи за откривање главно Cryptococcus neoformans и други скриени габи во суспензија на изми клетки (на пример, CSF талог). Обоени секундарниот домен, а не самото тело, што го прави возможно да се види било капсула околу телото како ореол. За други патогени тест не е толку чувствителен како и откривање на криптококен антиген. Специфичноста на метод е исто така ограничен: бели крвни клетки може да се појави скриена патогени.

Рајт боење и Giemsa. Таквите бои се користат за откривање на паразити во крвта, Histoplasma capsulatum фагоцитите и ткиво клетки, интрацелуларен подмножества формирана вируси и кламидија трофозоитите на пневмонија jirovecii и одредени интрацелуларни бактерии.

Trichromic боење (боење Gomori - Wheatley) и железо hematoxylin боење. Овие бои се користат за откривање на цревни протозои.

Боја Gomory - Уитли се користи за откривање микроспоридија. Тој не може да се открие јајца на хелминти и не lichinki- сигурност да се идентификуваат Cryptosporidium. Габи и човечки клетки, исто така, се валкани.

Железо hematoxylin дамка на диференцирани клетки, активирајте клетки и јадра. helminth јајца може да биде обоен во темна боја, што го прави тешко да се идентификуваат.

култура

Тест култура - микробен раст на цврста или течна зголемување на хранливи материи средината на бројот на организми овозможува идентификација. Култура, исто така го олеснува тестирање на антибиотска осетливост.

Видео: Дијагноза на циститис. Дел 3 052-2506596

Комуникација со лабораторијата е важно. Иако поголемиот дел од материјалот на примерокот обложен на општа намена медиум (на пример, крв или чоколаден агар), некои патогени бара вклучување на одредени хранливи материи и инхибитори или други посебни usloviy- ако постои сомневање за еден од овие патогени или ако пациентот доби антибиотици, потребно е извештај до лабораторија. За изворот на извештајот на примерок такви податоци во лабораторија може да се разликува патогени од нормалната флора.

Земање мостри е важно. Погрешен тип на брис може да доведе до лажно негативни резултати. Дрвени стапчиња за прачки тест токсични за некои вируси. Стапчиња со стапче врвот памук токсични за некои бактерии и кламидија. Хемокултури бараат деконтаминација и дезинфекција на кожата (на пример, повидон јод брисеви им беше дозволено да се исуши и беше отстранет со 70% алкохол). Најчесто се користи повеќе примероци, секој од посебна ограда mesta- можност врши во висина на треска, ако е можно. Нормалната флора на кожата и мукозните мембрани, која расте дури и во иста крв, се третираат како инфицирани. Ако примерокот на крв се добива од централна вена или артерија, периферни примерок на крв треба да се преземат за да се разликува системски бактериемија од катетер инфекција. Култура на заразени катетри обично стануваат позитивни побрзо и содржи повеќе од организми и комбинација култури на периферната крв. Некои габи, особено на почвата (на пример, Aspergillus sp.), Обично не може да биде култивиран од крв.

Примерокот треба брзо да се транспортира во соодветна средина и под услови со кои се ограничува растот на било кој друг потенцијално инфицирање флора. Точно да се утврди износот на патоген да се спречи растот на патогени дополнителни копии треба да се веднаш се транспортира до лабораторијата, или, ако превозот е одложен, се стави во фрижидер (во повеќето случаи).

Постојат посебни услови за одредени култури.

Анаеробни бактерии не треба да се изучува во тест културата, диференцијација на патогени од нормалната флора често е невозможно. Примероци Примероците треба да бидат заштитени од воздух. анаеробни транспорт медиумите се користат за потези. Примероци примероци собрани со помош на шприцот (на пример, содржината апсцес) мора да се транспортира во шприцот.

Микобактерии е тешко да се посветам. На примероци кои содржат нормална флора (на пример, спутум), прво треба да бидат деактивирани и концентрирани. Mycobacterium tuberculosis и некои други микобактерии, расте бавно. Раст на M. tuberculosis, имаат тенденција да се случи побрзо во течности отколку во солидна медиум. Обично, употребата на автоматски системи со течен медиум може да се зголеми во рок од 2 недели во споредба со >4 недели на цврсти медиум (агар Lowenstein - Jensen). Покрај тоа, мал број на организми може да биде присутен во копија. Ограда повеќекратни инстанци на истото место може да помогне да се зголеми веројатноста за откривање на патогени. Во текот на 8 недели не треба да се меша накалемени медиум. Ако тоа е осомничен атипична микобактерија, тоа треба да го извести лабораторија.

Вируси обично се култивира на дамки и ткиво, обично се транспортираат во средини кои содржат антибактериски и антифунгални лекови. Содржината на примероци накалемени примероци во култура на ткиво, кои го поддржуваат растот на вирусот и го инхибираат сите други микроби. Вируси се многу нестабилни (на пример зостер вирус) се накалемени во културата ткиво во рок од 1 час од колекцијата. Стандард за култура на ткиво е најчувствителниот. Експрес култура на ткиво клетки (плоча метод: броење дамки на monolayer клетка) може да обезбеди побрз, но укажува на резултатите. Некои од најчестите вируси не може да се открие со користење на конвенционални методи култура tkaney- бараат алтернативни методи за дијагностицирање.

Примероци габи кои произлегуваат од не-стерилни места треба да се накалемени во средина која содржи антибактериски агенс. Во случаи мора да се одржи на 4 недели пред отфрлајќи.

анализа на чувствителност

Сензитивните анализи се утврди отпор микроб на антибиотици од страна на изложеност на стандардизиран концентрација на антибактериски лекови. Анализа на чувствителноста може да се врши за бактерии, габи и вируси. За некои организми, добиени од еден лек резултати да се предвидат резултатите на овие лекови. Така, не сите потенцијално активни лекови се тестира.

Проба сензитивност се врши ин витро и не може да се земат предвид многу фактори природни услови (на пример, фармакокинетиката и фармакодинамиката, карактеристика на концентрацијата на лекот во одредени ткива и органи на човечкото тело имунолошкиот систем), кои влијаат на успехот на лекувањето. Така, резултатите од тестовите на чувствителност не секогаш се предвиди исходот на лекувањето.

Проба чувствителност може да биде квалитативен, семиквантитативни или со користење на методи за изолирање на нуклеински киселини. Анализата исто така може да се оцени ефектот на комбинирана примена на различни антибактериски лекови (тест заеднички ефекти).

квалитативни методи. Квалитативни методи се помалку прецизни од семиквантитативни. Според резултатите вообичаено се одредени чувствителност (S), на среден резултат (I) или отпорност (R). метод најчесто се користи диск дифузија (исто така познат како тест Кирби - Бауер) погодна за брзо растечки организми.

Антибиотик импрегнирани дискови беа ставени во агар плочи на кои е тестиран на микроорганизми. По инкубација (обично 16-18 часа) се мери пречникот на местото за инхибиција околу секој диск. Секој комбинација антибиотик микроорганизам имаат различни дијаметри со вредност S, I, или Р.

Други методи кои бараат помалку строги параметри анализа придржување може да се користи за брзо да се провери на поединецот организмот отпорен на одреден лек или класа на лекови или специфични антибактериски комбинации (на пример, отпорност на оксацилин во метицилин отпорни на Staphylococcus aureus, производство на Б-лактамаза).

Полу-квантитативни методи. Семиквантитативни методи за определување на минимална концентрација на дрога кој го инхибира растот на одредена организам ин витро. минимална инхибиторна концентрација (MIC) се дефинира како број, кој потоа може да се смета за еден од три групи: S (подложни), I (средно) или (отпорни) R. MIC Одредување е првенствено се користи за да се бактерии, вклучувајќи анаероби и Mycobacterium понекогаш се користи за габи, особено видови на Candida, добиени од стерилни сајтови. Минимална неутрализира (бактерицидно) концентрација (MBC), исто така може да се утврди, но тоа е технички тешко и стандарди за толкување се уште не се договорени. МБЦ анализа на вредноста е, тоа покажува дали лекот може да биде бактериостатско и бактерицидно.

На антибиотик може да се растворени во агар или супа, кои потоа се додава на микроорганизам. Осветлување супа - златен стандард, но тоа е одземаат многу време, бидејќи само една концентрација на лекот може да се тестира во една цевка. А повеќе ефикасен метод го користи лента на полиестер филм лента импрегниран со соодветен антибиотик концентрација. Стрипот е ставен на агар плоча содржи вметнување материјал, и IPC утврдени од страна на локација на лентата која започнува ingibitsiya- голем број на антибиотици може да се провери на истата плоча.

IPC им овозможува за корелација помеѓу чувствителноста на микроорганизам на дрога и концентрација на дрога остварлив во ткаенини, не-протеин (слободен дрога). Ако концентрацијата на слободен дрога во ткивото е повисока од МИЦ, веројатноста за успешно лекување е висока. Слично на тоа, податоци за S, I и R се во корелација со БМД. Тие обично се базираат на достижни концентрации на слободен лек во серум или плазма.

Методи за откривање на нуклеински киселини. Овие анализи се базираат на методи за детекција на нуклеински киселини слични на оние што се користат за идентификација на микроорганизми, но модифицирани за откривање на познати отпор гени или мутации. Пример - Meca, ген за отпорност на оксацилин во С. aureus- ако генот е присутна, организмот се смета отпорни на сите-лактамски антибиотици. Иако е познато многу такви гени, но нивната идентификација не е право на дефинитивен заклучок за отпорност ин виво. Покрај тоа, бидејќи тие може да се претстави нови мутации или други гени отпор, нивното отсуство не гарантира чувствителност на дрога. Поради овие причини, и поради тоа што тестовите се ограничени во број и се скапи, тие не се широко користени. Методи за откривање на нуклеинските киселини не го замени стандардниот тест култура и вообичаената анализа на чувствителност.

Имунолошки тестови за заразни болести

Имунолошки тестови користење на антиген за откривање на антитела на патоген или антитело за откривање на патоген антиген во примерок на пациентот. Третманот варира, но ако треба да се одложи анализа, примерокот, како по правило, треба да се стави во фрижидер или замрзнување, за да се спречи растењето на бактерии.

тестови на аглутинација. Во аглутинација анализи (на пример, латекс аглутинација, koaggregatsiya) на честички (латекс перла или бактерија) е поврзан со антиген-антитело или реагенс. Како резултат на комплексни честички се меша со мострата (на пример, CSF, серум) - ако е посакувано антитело или антиген присутни во примерокот, вкрстено поврзување на честички се јавува во форма на аглутинација, која може да се мери.

Ако резултатите се позитивни, истражуваната секвенцијално биолошки течности разредена и тестирани. Аглутинација со повеќе разредена решенија укажува на повисоки концентрации на саканата антиген или антитело. Титарот правилно да снима и реципрочни аглутинација кога се разредува во пример на распаѓањето 32 покажува дека аглутинација се одржа во раствор разреден до 1/32 од почетната концентрација.

Видео: Laferobion

Аглутинација тестови обично побрзо, но помалку подложни од многу други методи. Тие, исто така може да се утврди на серотипови на одредени бактерии.

фиксација на комплемент. Оваа анализа ја мери потрошувачката на комплемент (дополнување фиксација) на антитела во серумот или цереброспиналната течност. Тестот се користи за дијагностицирање на одредени вирусни и габични инфекции, особено кокцидиоидомикоза. Примерокот се инкубираат со познати количини на комплементот и антиген. Степенот на фиксација на комплемент покажува релативната количина на антитела во примерокот. Анализата може да се измери титар на IgG и IgM антитела, или може да се модифицира за да се открие специфични антигени. Анализа на точни, но има ограничена примена, одзема време и бара многу средства за контрола.

поврзан имуносорбент. Овие тестови се користи во комбинација антитела на ензими, за откривање на антигени или откривање и мерење антитела. Поврзан имуносорбент (ELISA) и ензимски имуно, се најмногу се користи ензимски поврзана имуносорбентна (ELISA). Бидејќи повеќето чувствителни имунолошки висока, тие најчесто се користи за скрининг. Титар може да се утврди од страна на сериски разредување на мострата, како и во анализа на аглутинација.

Анализата на чувствителноста иако обично висока и може да се разликуваат во зависност од возраста на пациентот, серотип микроб, како примерок или клинички стадиум на болеста.

Анализа на врнежи. Овие тестови се измери антиген или антитела во телесни течности степен на видливи таложење на комплекси на антиген-антитело во рамките на гел (агароза) или во раствор. Постојат многу видови на анализа на врнежи (на пример, од страна на Ouchterlony двојно дифузија, контра-имуноелектрофореза), но нивната употреба е ограничена. Вообичаено, на примерок од крв се меша со антиген тест на за откривање на антитела заштитни, често со габична инфекција или гноен менингитис. Како позитивен резултат бара голем износ на антитело или антиген, чувствителноста е на ниско ниво.

Западен размачкана анализа. Оваа анализа открива антибактериски антитела во примерок од материјал земен од пациентот (на пример, серум, други телесни течности) од страна на нивната реакција со антигени (на пример, вирусни компоненти), кои се имобилизирани да размачкана мембрана.

Во Западен размачкана анализа, како по правило, добра чувствителност, иако често е помала од онаа на скрининг тестовите, како што ELISA, но во целина тоа има висока специфичност. Тоа најчесто се користи за да се потврди позитивните резултати добиени во анализа на проверка.

Технички модификации линеарна Западен размачкана на имунолошка проба (ЛИА) - анализа на рекомбинантен имунобио (РИБА), кој се користи синтетички или рекомбинација-binant произведени antigeny- и immunochromatographic анализа кој брзо може да се тестира примероци за специфични микробиолошки антигени или антитела пациентот.

Методи за да се идентификува не-нуклеински киселини за откривање на заразни болести

Веднаш штом беше идентификуван култура на тест организам, тоа треба да бидат идентификувани. методи за откривање на нуклеинска киселина не-вработуваат фенотипски (функционална или морфолошки) се одликува микроорганизми, отколку генетски идентификација.

Карактеристики на раст на патогенот во хранливи материи медиуми - големина колонија, боја и форма, даде информации за да се идентификуваат видовите, како и со Грам боење и алгоритам за понатамошни анализи. Достапно бројни биохемиски testy- секоја карактеристика за одреден тип на микроорганизми (на пример, аеробни или анаеробни бактерии). Некои процени способноста на телото да се користи на различни супстрати за раст. Други процени присуство или активноста на клучните ензими (на пример, коагулаза, каталаза). Анализите се прави, чекор по чекор. тест секвенца е многу разновидна и може да се разликува малку во различни лаборатории.

методи за откривање на нуклеинска киселина Non-може да биде врз основа на Прирачникот за автоматски системи, или тоа може да биде хроматографски методи. Некои комерцијално достапни пакети вклучуваат посебни тестови кои може да се врши при користење на еден примерок на материјал и е генерално корисна за дијагноза на широк спектар на микроорганизми. Ваквите системи анализа може да биде многу прецизен, но може да потрае некое време, и до неколку дена.

хроматографски методи. Микробиолошки компоненти или производи се одделени и идентификувани со помош на течна хроматографија со високи перформанси (HPLC) или гасна хроматографија. Обично, откривање е со споредување на масни киселини на организмот на базата на податоци. Хроматографски методи може да се користи за да се идентификуваат аеробни и анаеробни бактерии, микобактерии и габи. Точноста зависи од анализа на квалитет на тест примерок култура и квалитетот на базата на податоци, кои можат да бидат неточни или нецелосни.

Методи за идентификација на заразна болест врз основа на откривање на нуклеински киселини

Врз основа на идентификација на нуклеински киселини покаже одредени методи за ДНК на организмот или РНК, извлечена од микроорганизам. Секвенци може да биде засилена ин витро. Врз основа на откривање на техники на нуклеинска киселина обично се многу сензитивни и специфични и може да се користи за сите видови на бактерии. Резултатите може да се добијат брзо. Од секоја анализа обично се специфични за одреден организам, лекарот треба да знае за дијагностички можности и да побара соодветна анализа. На пример, ако пациентот има симптоми кои укажуваат на грип, но грип сезона е завршена, држејќи вкупно вирусна дијагностичка анализа (на пример, вирусна култура), а не специфична анализа на грип е подобро, бидејќи други вируси (на пример, параинфлуенца аденовирус) може да биде предизвика.

Врз основа на определување на нуклеински киселини се квалитативни тестови, но постојат квантитативни методи за определување ограничен, но зголемување на бројот на инфекции (на пример, HIV, цитомегаловирус, човечки Т-лимфотропен вирус). Овие методи може да биде корисно за дијагноза и следење на одговорот на третманот.

Методи кои не вклучуваат амплификација на нуклеинска киселина се користи во случаи кога организмот најпрво беше откриена во тестот култура и е присутен во примерокот на висока концентрација.

засилување. Во методите на нуклеинска киселина земање на мал износ на ДНК или РНК, репродукција нив многу пати, а со тоа може да се открие мали траги на микроорганизми во примерокот. Овие методи се особено корисни за агенти, кои се тешко да се посветам или идентификувани користење на други методи (на пример, вирусите се облигатни интрацелуларни патогени микроорганизми, габи, микобактерии, некои други бактерии), или за оние организми кои се присутни во мали количини.

Овие анализи може да вклучи во цел засилување (на пример, PCR, реверзна транскриптаза-PCR [RT-PCR], колото засилување, амплификација на транскрипција) засилување на сигналот (на пример, анализа разгранет ДНК хибрид фаќање), засилување на мострата (на пример, верижна реакција лигаза на , воведува форма расцеп цикличен тест) или postamplifikatsii анализа (на пример, секвенционирање засилена производ, microarray анализа и крива Liquidus анализа, како што се прави во реално време PCR).

Соодветната земање и чување пред пристигнувањето во молекуларната дијагностичка лабораторија е важно. Од методите за засилување толку чувствителни, лесно да се лажни позитивни резултати трага од контаминација на примерокот или опрема може да се инсталира. И покрај високата чувствителност, понекогаш постојат лажно негативни резултати, дури и кога пациентот има клинички симптоми (на пример, вирусна инфекција на Западен Нил). Лажно негативни резултати може да се минимизира

• преку избегнување на употребата на стапчиња за јадење за тестови со дрвени прачки и совети од волна
• брз транспорт на примероци,
• замрзнување или со ставање на примероци во фрижидер, ако превозот се >2 часа.

Замрзнување - типичен метод на складирање анализи амплификација на нуклеинска киселина. Сепак, мострите мора да се чуваат во фрижидер, а не да биде предмет на замрзнување ако се сомнева дека нестабилна вируси (на пример, херпес зостер вирус, вирусот на грип, ХИВ-2), или ако планирате да студирате вирусни култури (замрзнати примероци не се погодни за посевите).