Имуноглобулин реактивност. Методот на спин-етикетирани хаптени

Хсиа и мали (Хсиа, Литл, 1973) истражуваше интеракција на две спин-етикетирани хаптени - DNP hydrazone Дериват на N-1-oxyl-2,2,5,5-тетраметил-3-пиролидинон (I) и M-1- (oxyl-2,2,5,5-тетраметил-3-метиламино) 2 4-dinitrobenzene (II) со две mislomnymi IgA - MOPC 315 и 460 како метод на EPR, и да се намали квантната принос на флуоресценција на протеинот.

Утврди дека со врзувачки хаптени I и II протеин MOPC 315 N-O-група во двата случаи се силно имобилизирани состојба, но два вида на имобилизирани компонента се забележи во ESR спектар на соединението II како што се противат на опсегот на соединенија I. Кога се врзува за протеините MOPC 460 слободата на ротација N-О група соединение јас, исто така, во голема мера ограничен, додека на групата соединение ротација-N-O II врзување на овој протеин има мал ефект.

Сепак, судејќи според блиску намалување на квантната принос флуоресценција врз врзувачки протеин спин-етикета хаптени и термодинамика на проучување на овој процес, афинитетот на соединенијата I и II протеини MOPC 315 и 460 се разликуваат малку. Како резултат на тоа, степенот на имобилизација N-О група се вртат-етикета хаптен не се во сите случаи се карактеризира јачината на комплексот.

Според авторите, разликите во имобилизација соединенија I и II можат да бидат предизвикани од страна на две причини: 1) лиганди се поврзе со различни сајтови conformationally цврсти активни страница, 2) на структура на активниот центар може да се стабилизира на различни степени во зависност од разликите во структурата на лиганди.

со други Ние истрага за причините, предизвикува појавата на два вида на имобилизирани компонента во ESR спектар на сложени II протеин MOPC на 315. Тоа се покажа дека тоа се должи на две форми enantomernymi спин-етикетирани хаптен II. N-О група формираат лиганд со обележана помалку хидрофобен микросредина, а вториот - повеќе хидрофобни, што резултира во различна позиција на имобилизирани компонента на оската на магнетното поле сила. Поврзување одделени форми enantomernyh (спин-етикета амини - DNP) протеин MOPC 315 (што резултира во појавата на само еден тип на компонента.

Методот на спин-етикетирани хаптени

Замена на спин-етикетирани хаптени во активната сајтови на антитела хомологни хаптен E се користат Leutom и членовите (Leute e. a., 1972) за да се одреди концентрацијата на морфин во раствор на тест. Овој метод се користи ефектот на силно зголемување на висината на ИПР линии на спектарот на спин-етикетирани морфиум во процесот на транзиција од имобилизирани државата за бесплатно, како резултат на поместување на активната центар. Висина на тесни линии дезинхибирано ИПР карактеристика спектар во оваа концентрација случај морфиум во тест решение.

Долната граница на чувствителност таков метод-10 7М морфин a (0,03 mg / ml). Понатаму, овој пристап е развиена во (Монтгомери д. A., 1975) и беше искористена за да се утврди концентрацијата на голем број на лекови во серумот. Тоа се покажа како 100 (пати повеќе чувствителни отколку конвенционалните хемиски метод и поседува висока специфичност. За еден определување прилично 50 .mu.l серум.

Хсиа и соработници се користи комплекс DNF - метилен (N-1-oxyl-2,2,5,5, тетраметил-3-метил-aminopyrrolidine-2,4-dinitrobenzene) со миелом IgA (MOPC 315) како систем модел да учат вкрстена реактивност на протеинот во однос на DFT и неговите аналози. Од износот на слободни, активни центри раселени од спин-етикетирани хаптен беше оценето од интензитетот на ИПР компоненти спектарот vysokopolyyuy. Квантитативни проценки добиени со овој метод се во добра согласност со резултатите од рамнотежа дијализа. Предложениот метод е многу ветува во имунохемиски студии.
следните заклучоци за структурата на активните сајт на антитела може да се направи врз основа на добиените податоци.