Индиректно дијагноза на генетски болести. Точноста на молекуларна дијагностика на можните извори на грешка.

Индиректни (индиректни) пристап за молекуларна дијагностика историски тоа е рано и универзален. Тоа е врз основа на анализа на интра-и vnegennyh полиморфни сајтови. Како таа нормално штрчат краток ДНК-секвенца од истиот хомологниот хромозом региони кои се разликуваат во примарната структура. Овие дијагностички полиморфни сајтови може да се наоѓа или во рамките на самиот ген или во непосредна близина.

Неопходен услов за индиректна ДНК дијагностика Тоа е присуството во семејството на болно дете или можност да студираат на неговата ДНК (крв дамки, хистолошки препарати, итн.) Воспоставување на информации содржина вклучува идентификација на полиморфни сајт, кој може да се користи како молекуларен маркер за дискриминација и мутанти и нормален алел. Во случај на автосомно рецесивно болести родителите ќе бидат хетерозиготни за овој полиморфизам, а пациентот - хомозиготи на еден алел на маркер. Тоа хетерозиготност за молекуларна полиморфизми дефинира информациите содржината на одредена семејство висок ризик раѓање на дете со генетско заболување. Во зависност од дистрибуцијата на маркер алели на хомологни хромозоми на пациентот и неговите родители, семејството може да биде целосно информативни за ДНК дијагностика делумно информативни или неинформативни.

Тоа е од клучно значење да се анализира семејство висок ризик е бројот на полиморфни сајтови на еден ген, да се утврди точно на било која специфична алел наследен мутирани гени, и да се направи семејство целосно информативни за иднината на ПД.

точка Предноста на индиректниот метод - можноста за ДНК дијагностика без точна идентификација на мутации во генот, дури и во отсуство на прецизни податоци за идентификација и клонирање на мутиран ген. Нејзините значаен недостаток е неможноста да се дијагностицира во отсуство на болно дете (не може точно да се утврди кои полиморфни алели поврзани мутираниот ген), грешка во дијагнозата, поради можноста за премин преку текот на мејозата и спроведување на полиморфни сајт на здрава алели.

Точност на молекуларна дијагностика, можните извори на грешка

Во извршувањето на пренатална дијагноза од страна на молекуларни методи тоа е важно да се има во предвид два главни извори на грешка:
- контаминација примерок на плодот на мајката клетки;
- можноста за премин преку при користење на индиректен метод.

Со оглед на многу високо чувствителноста на методот PCR, важно е да се избегне контаминација на примероци на фетусот ткиво на мајката ќелија. За чистота на мострата за анализа може да bp се постигне само со внимателен избор на плацентарната хорионски ресички или под двете очи зголемувачот, проследено со измивање со солена вода. Тоа е особено важно да се спречи мајката контакт со крв во случај на земање примероци крв од плодот кабел со кордоцентеза. Високо квалификација на лекарот-оператор како и за употребата на квалитативните реакции да се идентификуваат мајчината крв нечистотии се избегне оваа компликација. Ризикот од такви дијагностички грешки може значително БП umenshen кога се работи под стерилни услови.

Јачина на молекуларна дијагностика од страна на директна метод, т.е. со идентификување на мутации во генот е многу висока и се приближува апсолутна. Сепак, со оглед на целиот спектар на можни промени во геномот во текот на созревањето на гамети (премин-over), и во раните фази на ембриогенезата (мутаген ефект) е попрецизен дијагностички индекс од околу 99,9%. Значително потешко да се оцени резултатите од молекуларна дијагностика индиректен метод. Во случај на регистрација на intragenic полиморфизми точноста индиректна дијагноза е доста висока, бидејќи количината vnutritennogo кросовер обично не повеќе од 0,1% за повеќето од гените.

Исклучок може да биде само релативно голем гени, како ген дистрофин, хемофилија А, неурофиброматоза, и други. Така, во случај на стапката на дистрофин погрешна дијагноза може да биде до 2%, што одговара на кросовер vnutritennogo висока фреквенција (околу 2%) во овој гигант ген (2,2 милиони bp). Исто така е важно да се земе во предвид степенот на роднини и probands на пациентот кој поминува АП. Количината на можни грешка се зголемува ако алел маркерот не е утврден во брат овошје, додека другите негови роднини. Особено треба да се процени резултати индиректна дијагноза користејќи vnegennyh polymorphic Локи. Се верува дека со сигурност да се трошат АП во овие случаи може да биде само истовремено тестирање на неколку полиморфни сајтови flanking мутираниот ген. Обично се користи за молекуларна дијагностички маркери, на фреквенцијата на рекомбинација кои мутирани алели е помалку од десетинки или стотинки од процент. ДНК полиморфизми карактеристика секвенци на буквари за PCR, индиректни методи на вредности на грешки за разни болести дијагностицирани пренатално се сумирани во коментарите и монографии.