Фактор Лајден

Како што е споменато погоре, ген абнормалност на коагулационен фактор V G 1691>А беше откриен во 1994 година од страна на Р. Bertina et al. A единечни нуклеотидни замена на гванин да аденин на позиција 1691 (1691 G>А) во егзон 10 F5 ген предизвикува молекуларна дефект на коагулационен фактор V. Поради замена на позиција 506 од молекулата proaktselerina аргинин со глутамин (Arg506Gln) нарушена неговата способност да пропадне, што резултира во системот за формирање дисфункција антикоагулантна на протеин C и тенденција до релапс тромбоза. Генетските абнормалности на коагулационен фактор V (Leiden) е најчеста тромбофилните дефект во европската популација.

За откривање на генетски аномалии embodiments користење на PCR. Висока чувствителност и специфичност на PCR се обезбеди ин витро синтетизира олигонуклеотиди комплементарна на соодветниот регион на генот на човечкиот коагулационен фактор V.

Недостатокот на унифицирани номенклатура на генетски дефекти предизвикани широко распространета во современата научна литература бројни знаци на оваа аномалија: F5: 1691 G>А, Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Лајден (leydenovskaya) и други.

принципот на методот

За идентификација на полиморфни алели во F5 генска амплификација на користење на соодветните делови на генот со помош на PCR со следните определување на амплификација на производи.

Реагенси и опрема

• Контролни примероци со алел дивиот тип и мутант тип на алел.
• За да се утврди аномалии F5 1691 G>се користат во две буквари. Primer 1 (напред прајмер): ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, Primer 2 (обратна прајмер): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Thermocycler и друга опрема за извршување на PCR.

Примероци на крв за студија за истражување на материјалот може да биде било кој извор на ДНК, но повеќе се користи венска крв, кои се во цевки содржи EDTA. Примероци се чуваат пред студија на температура од 2 ... + 8 ° C до 24 часа. Долго се чуваат примероци можат да бидат само во замрзната состојба на -40 ... 70 ° C.

Изолација на ДНК од клинички примероци на материјал може да се врши од страна на разни методи, на пример, со користење на силициум-базирани проекти, поставува microcentrifuge колони поставува врз основа на екстракција фенол хлороформ и други.

Методи за утврдување на

Методот се базира на копија избирачки регион на ДНА повеќекратно користење на ин витро ензим. Напредок во студијата треба да ги исполнуваат избраните опрема и начинот на PCR анализа (гел електрофореза, флеш или слично.).

Видео: Холандија, Noord-Holland. Дел 1. 06-2011

Евалуација на резултатите од студијата

Оценување на резултатите се врши на начин кој овозможува замена полиморфни олигонуклеотид дом. ПРИМЕР визуелизира резултати на засилување е прикажано на сл. 5.1.

Видео: сите градови и земји на светот на едно место

Embodiments leydenovskoy аномалија резултати откривање на V генот на коагулационен фактор следниве: G / A - хетерозиготна форма аномалии на позиција 1691- A / A - хомозиготна аномалија. На население доминира генотип G / G.

Толкување на резултатите од истражувањето

Превозниците leydenovskoy F5 ген абнормалности се склони кон тромбоза, која значително го зголемува ризикот во бременоста, употребата на орална контрацепција, во постоперативниот период, и други. Џин пенетрација е нецелосно, па затоа голем број на превозници нема историја на тромботични нарушувања. Во овој олицетворение присуство на хомозиготна мутација фреквенцијата и интензитетот на тромбоза погоре. хетерозиготна за откривање на фреквенција аномалија, според литературата е околу 1-3% во популацијата.

замена на амино киселината на позиција 506 дава страницата на расцепување на молекулата коагулационен фактор V активиран протеин C, со што значително ја намалува стапката на својата деградација. Затоа, присуството на генот аномалии F5 G 1691>Отпор забележано коагулационен фактор Va со активиран протеин C.

Откривање на оваа мутација кај пациенти со рекурентна тромбоза страница оправда продолжено антикоагулантната профилакса. Таква студија може да се идентификуваат лицата кои треба да одлучи за употреба на антикоагуланси во спроведувањето на операцијата.

Видео: д-р Елена Berezovskaya - тромбофилија и бременоста

Причините за грешки

• Грешки пред-аналитички фаза на студијата (со кршење на складирање време или неправилно транспорт biomaterial нуклеински киселини може да се прекине, поради лажно негативни results- хепарин е во состојба да го инхибираат PCR, толку примероци на крв не смее да се врши во цевки кои содржат хепарин).
• Контаминација на примероци странски биолошки материјал.
• Кршење на принципите на зони лабораторија за молекуларна генетски истражувања.
• Одбивање да се учат на негативната контрола.
• Одбивањето да се изврши повторна анализа на позитивните примероци.
• Неуспехот на техники ДНК изолација.
• Специфичноста и осетливоста на ПЦР буквари зависи суштина на структура, така што употребата на буквари од различни производители може да предизвика добивање на различни резултати.

Други аналитички техники

PCR варијанти се најде да биде сигурен лабораториски постапки, може да се обезбеди висока чувствителност, специфичност и репродуктивност. Во поголемиот дел од случаи тромбофилните за дијагностицирање на состојба поврзана со оштетен proaktselerina инактивација може да се користи од страна на метод на коагулација на одредување на отпорност на активиран протеин C. Забелешка, сепак, дека други нарушувања (хиперпродукција Antihemophilic глобулин, VA et al.) Исто така можат да предизвикаат отпорност на коагулација фактор V кон активиран протеин C.