Ген аномалија протромбин 20210 g / a

Во семејствата на пациентите со тромбоза откриени автозомно доминантно наследување F2: 20210 G / А.

Во моментов поврзани со оваа генетска аномалија со хиперпродукција на протромбин. Сепак, и покрај техничката способност да се утврди покачени нивоа на протромбин, откривање на оваа болест треба да се базира исклучиво на PCR податоци на висока сензитивност и специфичност на PCR обезбеди ин витро синтетизира олигонуклеотиди комплементарна на соодветниот дел на протромбин хуманиот ген.

принципот на методот

За идентификација на полиморфни алели во F2 генска амплификација на користење на соодветните делови на генот со помош на PCR со следните откривање на производи засилување.

Реагенси и опрема

• За да се утврди аномалии F2: 20210 G / А се користи следниве praymerypraymer 1 (напред прајмер) - 5`-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (нуклеотиди 20.035-20.054) - Primer 2 (обратна прајмер) - 5`-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (нуклеотиди 20229- 20211).
• Контролни примероци со алел дивиот тип и мутант тип на алел.
• Thermocycler и друга опрема за извршување на PCR.

Примероци на крв за студија за истражување на материјалот може да биде било кој извор на ДНК, но повеќе венска крв се користи, кои се во цевки содржи EDTA Примероците биле складирани пред студија на температура од 2 ... + 8 ° C до 24 часа. Примероците биле складирани Long може да бидат замрзнати на -40 ..- 70 ° C.

Изолација на ДНК од клинички примероци на материјал може да се врши од страна на разни методи, на пример, со користење на силициум-базирани проекти, поставува microcentrifuge колони поставува врз основа на екстракција фенол хлороформ и други.

техника перформанси

Методот се базира на копија избирачки регион на ДНА повеќекратно користење на ин витро ензим. Напредок во студијата треба да ги исполнуваат избраните опрема и начинот на PCR анализа (гел електрофореза, флеш или слично.).

Евалуација на резултатите од студијата

Евалуација на резултатите се врши на начин кој овозможува да се визуелизира олигонуклеотид полиморфна супституција. ДНК фрагменти беа утврдени со користење на различни флуоресцентни бои, која специфично се врзуваат за ДНК.

Толкување на резултатите од истражувањето

За многу носители на полиморфизам карактеристика различна локализација тромбоза, ризик со што се зголемува значително во присуство на бременоста, употребата на орална контрацепција, во постоперативниот период, и други. Нецелосна пенетрација ген, во оваа смисла, некои превозници немаат историја на тромботични нарушувања. Во присуство на овој полиморфизам варијанта хомозиготна возраст од првата епизода е помал, како и зачестеноста и тежината на тромбоза погоре. хетерозиготна за откривање на фреквенција аномалија, според литературата, е околу 1-2% во популацијата. Во присуство на F2: 20210 G / A нивоа на протромбин кај околу 1,5-2 пати повисоки од нормалните.

Вели аномалија откривање на протромбин ген кај пациенти со рекурентна тромбоза поткрепи овозможува продолжено антикоагулантната профилакса. Таквото истражување помага да се идентификуваат бремените жени со зголемен ризик од тромбоза.

Причините за грешки

• Грешки пред-аналитички фаза на студијата (во кршење на условите на чување или неправилно транспорт biomaterial нуклеински киселини може да се прекине, поради лажно негативни results- хепарин може да го инхибираат на PCR реакцијата, па примероци од крв не смее да се врши во епрувети кои содржат антикоагуланс).
• Контаминација на примероци странски биолошки материјал.
• Кршење на принципите на зони лабораторија за молекуларна генетски истражувања.
• Одбивање да се учат на негативната контрола.
• Одбивањето да се изврши повторна анализа на позитивните примероци.
• Неуспехот на техники ДНК изолација.
• Специфичноста и осетливоста на ПЦР буквари значително зависи од структурата, па, користењето на буквари од различни производители може да предизвика различни резултати.

Други аналитички PCR технологијата на различни embodiments се сметаат за веродостојни лабораториски постапки во состојба да обезбеди висока чувствителност, специфичност и репродуктивност. И покрај постоењето на техничките можности да се идентификуваат покачени нивоа на протромбин, дијагнозата на тромбофилија треба да се базира исклучиво на употребата на ПЦР варијанти.